子牛甲状腺細胞におけるタンパク質結合MAN9GLCNAC2、MAN8GLCNAC2、およびMAN7GLCNAC2の一時的なグルコシル化糖タンパク質の処理における認識シグナルの可能性がある

[U-14C]グルコース合成タンパク質結合GLC3MAN9GLCNAC2、GLC2-MAN9GLCNAC2、GLC1MAN9GLCNAC2、GLC1MAN8GLCNAC2、およびGLC1MAN7GLCNAC2とインキュベートした子牛の甲状腺スライス。最後の3つの化合物のグルコース残基の標識は、インキュベーションから5分以内に検出できましたが、GLC1MAN8GLCNAC2およびGLC1MAN7GLCNAC2のα-マンノシダーゼ耐性コアのマンノース残基における放射能の出現は、それぞれ30分と60分以上かかりました。GLC1MAN9GLCNAC2の同じマンノース残基でラベルが検出された後に表示されます。グルコース残基は、ラベルのないグルコースでスライスを追いかけたときに除去されました。消滅する最後の化合物はGLC1MAN9GLCNAC2でした。UDP- [U-14C] GLCとインキュベートした子牛の甲状腺ミクロソームは、上記の5つのタンパク質結合オリゴ糖を合成しました。インキュベーション混合物へのGDP-MANに加えて、ドリコル-P-P-Pまたはタンパク質に結合したGlc3MAN9GlCNAC2の形成が大幅に減少しましたが、GLC1MAN9GLCNAC2、GLC1MAN8GLCNAC2、およびGLC1MAN7GLCNAC2の標識は影響を受けませんでした。Kojibioseを添加すると、Glc1Man8GlcNAc2およびGlc1Man7Glcnac2の形成に影響を与えることなく、タンパク質結合Glc3MAN9GlcNAc2のgreucoSylationが予防され、Glc1Man9Glcnac2の形成のみが部分的に減少しました。これらの結果は、Glc1Man8GlcNAc2およびGlc1Man7GlcNAc2が非グルコシル化種のグルコシル化によって形成され、Glc1Man9GlcNAc2のデマノシル化ではなく、おそらく後者の化合物の一部が同じ方法で形成されたことを示しています。

Calf thyroid slices incubated with [U-14C]glucose synthesized protein-bound Glc3Man9GlcNAc2, Glc2-Man9GlcNAc2, Glc1Man9GlcNAc2, Glc1Man8GlcNAc2, and Glc1Man7GlcNAc2. Although label in the glucose residues of the last three compounds could be detected within 5 min of incubation, appearance of radioactivity in the mannose residues of the alpha-mannosidase-resistant cores of Glc1Man8GlcNAc2 and Glc1Man7GlcNAc2 took more than 30 and 60 min, respectively, to appear after label was detected in the same mannose residues of Glc1Man9GlcNAc2. The glucose residues were removed upon chasing the slices with unlabeled glucose. The last compound to disappear was Glc1Man9GlcNAc2. Calf thyroid microsomes incubated with UDP-[U-14C]Glc synthesized the five protein-bound oligosaccharides mentioned above. Although addition to GDP-Man to the incubation mixtures greatly diminished the formation of Glc3Man9GlcNAc2 bound either to dolichol-P-P or to protein, labeling of Glc1Man9GlcNAc2, Glc1Man8GlcNAc2, and Glc1Man7GlcNAc2 was not affected. Addition of kojibiose prevented deglucosylation of protein-bound Glc3Man9GlcNAc2 without affecting the formation of Glc1Man8GlcNAc2 and Glc1Man7GlcNAc2 and only partially diminishing that of Glc1Man9GlcNAc2. These results indicate that Glc1Man8GlcNAc2 and Glc1Man7GlcNAc2 were formed by glucosylation of the unglucosylated species and not be demannosylation of Glc1Man9GlcNAc2 and that probably part of the latter compound was formed in the same way.