イミノビオチン親和性カラムとストレプトアビジンの検索への適用

Streptomyces avidiniiの培養ブロスからのストレプトアビジンの回収の方法について説明します。この手順の重要なステップは、培養濃縮液からイミノビオチンがAh-セファロース4bに付着する親和性カラムへのストレプトアビジンの吸着です。このカラムは、pH 11でストレプトアブビジンに結合し、pH 4でタンパク質を放出します。ストレプトアビジンの回復は実質的に定量的です。グリーン[Green、N。M.（1966）Biochem。J. 101、774-779]は、このように実用的な応用を発見しました。ストレプトアビジンは、4.07 +/- 0.02 molの[14C]ビオチンあたりのビオチンを結合し、椎間板およびスラブジェル電気泳動で判断されるように本質的に均質でした。ストレプトアビジンは、ビオチン結合能力を失うことなく広範囲にコキノイル化されました。125i標識ストレプトアビジンと125i標識されたコキノイルステプテプトアビジンは、pH 7.5でイミノビオチン-AH-セファロース4Bカラムによって保持され、pH 4.0で溶出されているという観察結果は、これらのヨード化されたタンパク質の便利な精製方法を提供します。ストレプトアビジンの回収に使用される技術は、一般にイミノビオチン化分子の分離に適用できます。

A method is described for the retrieval of streptavidin from the culture broth of Streptomyces avidinii. The key step in this procedure is the adsorption of streptavidin from culture concentrates to an affinity column in which iminobiotin is attached to AH-Sepharose 4B. This column binds streptavbidin at pH 11 and releases the protein at pH 4. The recovery of streptavidin is practically quantitative. The pH dependence of the iminobiotin-avidin affinity, discovered by Green [Green, N. M. (1966) Biochem. J. 101, 774-779], has thus found practical application. The streptavidin bound 4.07 +/- 0.02 mol of [14C]biotin per mol and was essentially homogeneous as judged by disc and slab gel electrophoresis. Streptavidin was extensively succinoylated without loss of biotin-binding capacity. The observations that 125I-labeled streptavidin and 125I-labeled succinoylstreptavidin are retained by iminobiotin-AH-Sepharose 4B columns at pH 7.5 and are eluted at pH 4.0 provides a convenient purification method for these iodinated proteins. The technique employed for the retrieval of streptavidin is generally applicable to the isolation of iminobiotinylated molecules.