蛍光ゼラチンを含む生細胞におけるフィブロネクチンマトリックスの研究

フルオレセインイソシオシアン酸結合ゼラチン（FITCジェラチン）（1 mg/ml）を使用して、培養中に固定されていない生細胞に細胞表面フィブロネクチンを局在させました。FITCジェラチンは、ラットおよびニワトリ胚線維芽細胞の原発性培養、ならびに変換されていない確立された細胞株の原発性培養でフィブロネクチンマトリックスを染色します。生培養細胞では、細胞外マトリックスの多くの領域のフィブロネクチンは抗体にアクセスできず、免疫蛍光染色では視覚化できません。対照的に、これらの領域のフィブロネクチンは、FITCジェラチンによって完全に染色可能です。低濃度（20マイクログラム/mL）で、FITCジェラチンは、原発性培養細胞のフィブロネクチンマトリックスを染色しますが、「変換されていない」確立された細胞株ではありません。SEMは、一次鶏の胚線維芽細胞によって発現するような、FITCジェラチンの低濃度で染色可能なマトリックスのみを検出できます。フィブロネクチンの細胞外マトリックスへの結合は非常に安定しており、FITCジェラチンは培養で少なくとも10日間マトリックスに結合したままでした。放射性ヨウ素化ゼラチンは、実存在状態および形質転換細胞における細胞表面フィブロネクチンのレベルを定量化するために使用されています。FITCジェラチンは、培養中の生細胞のフィブロネクチンを研究するための有用なプローブであると思われます。

We have used fluorescein isosthiocyanate-conjugated gelatin (FITC-gelatin) (1 mg/ml) to localize cell surface fibronectin in unfixed live cells in cultures. FITC-gelatin stains the fibronectin matrix on primary cultures of rat and chick embryo fibroblasts as well as untransformed, established cell lines. In live cultured cells, fibronectin in many areas of the extracellular matrix is inaccessible to antibody and cannot be visualized by immunofluorescence staining. In contrast, fibronectin in these areas is fully stainable by FITC-gelatin. At a low concentration (20 micrograms/ml), FITC-gelatin stains the fibronectin matrix of primary cultured cells but not of "untransformed" established cell lines. SEM can detect only the matrix stainable with the low concentration of FITC-gelatin, such as that expressed by primary chick embryo fibroblasts. The binding of fibronectin to the extracellular matrix is very stable and FITC-gelatin remained bound to the matrix for at least 10 d in culture. Radioiodinated gelatin has been used to quantitate the level of cell surface fibronectin in living normal and transformed cells. FITC-gelatin appears to be a useful probe for studying the fibronectin of living cells in culture.