軟寒天培養におけるヒト神経芽細胞腫細胞の直接クローニング

71の骨髄、3つのリンパ節、および神経芽細胞腫の18人の患者からの2つの固形腫瘍標本の神経芽細胞腫細胞を培養するために、in vitroの軟寒天技術を使用しました。各標本の半分が日常的な病理研究のために送られ、半分はソフトアガーシステムで培養されました。コロニーは、組織学的に陽性の骨髄で10日以内に現れました。光学顕微鏡、電子顕微鏡、カテコールアミン分泌、および核学は、コロニーが神経芽細胞腫細胞で構成されているという証拠を提供しました。標本の組織学的研究が神経芽細胞腫細胞を実証した38の事例がありました。ソフトアガーシステムは、これらのサンプルのうち30個（79％）でコロニーの成長を示しました。神経芽細胞腫に対して組織学的に陰性の合計38の標本がありました。これらの38の標本のうち30は、幹細胞アッセイに成長を示さなかった。6人の患者からの8つの組織学的に陰性の標本が、軟寒天系にコロニーを形成しました。これらの6人の患者のうち5人は、以前またはその後の骨髄検査で組織学的に腫瘍を示しました。組織学的と軟寒天培養結果の間に有意な相関に加えて（p <0.001）、プレートあたりのコロニー数と標本の組織学的状態の間に非常に有意な正の相関が存在します（p <0.005）。連続骨髄サンプルは、7人の患者に対して培養されました。プレートで発生するコロニーの数と患者の予後との間には関連があるようです。腫瘍反応と相関するメッキ効率の低下（メッキされた細胞の数あたりのコロニー数）。メッキ効率の増加は、腫瘍の再発を示しました。0.1％以上のメッキ効率は、特に予後不良を伝えました。神経芽細胞腫は、この柔らかい寒天培養システムでよく成長します。この優れた成長は、神経芽細胞腫の臨床科学および基礎科学研究の両方に良いモデルを提供します。

An in vitro soft agar technique was used in an attempt to culture neuroblastoma cells from 71 bone marrow, 3 lymph node, and 2 solid tumor specimens from 18 patients with neuroblastoma. One-half of each specimen was sent for routine pathology studies and one-half was cultured in the soft agar system. Colonies appeared within 10 days in histologically positive bone marrows. Light microscopy, electron microscopy, catecholamine secretion, and karyology provided evidence that the colonies were composed of neuroblastoma cells. There were 38 instances in which histological study of the specimen demonstrated neuroblastoma cells. The soft agar system showed colony growth in 30 of these samples (79%). There were a total of 38 specimens that were histologically negative for neuroblastoma. Thirty of these 38 specimens showed no growth in the stem cell assay. Eight histologically negative specimens from 6 patients formed colonies in the soft agar system. Five of these 6 patients showed tumor histologically on prior or subsequent marrow examinations. In addition to a significant correlation between histological and soft agar culture results (p < 0.001), there exists a highly significant positive correlation between the number of colonies per plate and the histological status of the specimen (p < 0.005). Serial marrow samples were cultured on 7 patients. There appears to be an association between the number of colonies that develop in the plate and the clinical course and prognosis of the patient. Decreasing plating efficiencies (number of colonies per number of cells plated) correlated with tumor response. Increasing plating efficiencies indicated tumor relapse. A plating efficiency of greater than or equal to 0.1% portended a particularly poor prognosis. Neuroblastoma grows well in this soft agar culture system. This excellent growth provides a good model for both clinical and basic science studies of neuroblastoma.