プラスミドPBR322およびPACYC184における転写シグナルの組織化

PBR322およびPACYC184のin vitro転写複合体の電子顕微鏡分析により、これら2つのプラスミドベクターでそれぞれ5つと6つの主要な転写単位が明らかになりました。これらのユニットは、個々のプロモーター強度に応じて、PBR322が最大10倍に異なるさまざまな効率で転写されます。最も興味深い信号配置は、テトラサイクリン耐性領域の開始時に見つかりました。そこでは、2つの部分的に重複するプロモーター（P1とP2）が反対方向に転写を横に開始します。P2はテトラサイクリン耐性を促進し、Hindiiiの切断によって不活性化されることが知られていますが、P1はその部位に統合されたDNAを転写することができ、おそらくPBR322のベータラクタマーゼ遺伝子の発現に寄与します。PACYC184では、P1、P2、およびCAT（クロラムフェニコール耐性）プロモーター（P5）に加えて、2つの開始部位（P3とP4）は、挿入シーケンス1の一部であると思われる領域でマッピングされました。これらのクローニング車両のより予測可能な利用率と、以前のクローニング結果の再解釈も可能にします。

Electron microscopic analysis of in vitro transcriptional complexes of pBR322 and pACYC184 revealed five and six major transcriptional units, respectively, in these two plasmid vectors. These units are transcribed with various efficiencies, depending upon the individual promoter strengths, which differ in pBR322 up to 10-fold. A most interesting signal arrangement was found at the beginning of the tetracycline resistance region, where two partially overlapping promoters (P1 and P2) initiate transcription crosswise in opposite directions. Whereas P2 is known to promote tetracycline resistance and to be inactivated by HindIII cleavage, P1 is able to transcribe DNA integrated at that site and probably contributes to the expression of the beta-lactamase gene in pBR322. In pACYC184, besides P1, P2, and the cat (chloramphenicol resistance) promoter (P5), two initiation sites (P3 and P4) were mapped in a region that appears to be part of insertion sequence 1. The maps of transcription signals permit a more predictable utilization of these cloning vehicles and also allow the reinterpretation of earlier cloning results.