33258 Hoechstで染色されたブロモデオキシリジン置換細胞のフローサイトメトリー分析

このホワイトペーパーでは、5-ブロモ - デオキシウリジン（BRDU）が細胞デオキシリボヌクレ酸に取り入れたため、33258 Hoechst染色された中国のハムスター卵巣線細胞からの蛍光の消光のフローシストメトリーの適用について説明します。細胞を、1 x 10（-8）から1 x 10（-4）Mの範囲の濃度でBRDUを含む培地で24時間成長しました。各濃度で、フローサイトメトリー、BRDU置換の程度によって決定される平均蛍光を測定しました。細胞の成長に対するBRDUの影響。1 x 10（-5）mのBrdu濃度が33258 Hoechstから4倍に蛍光を消すのに十分な置換をもたらし、サイクリング細胞と非サイクリング細胞を識別できると判断しました。このBRDU濃度で24時間成長後のBRDU置換の程度は64％でした。これらのデータは、33258 hoechst-brdu方法論を使用して、細胞全体のデオキシリボヌクレ酸合成を検出する可能性を示しています。

This paper describes a flow-cytometric application of the quenching of fluorescence from 33258 Hoechst stained Chinese hamster ovary-line cells due to the incorporation of 5-bromo-deoxyuridine (BrdU) into the cellular deoxyribonucleic acid. Cells were grown for 24 hr in medium containing BrdU in concentrations ranging from 1 x 10(-8) to 1 x 10(-4) M. For each concentration we measured the average fluorescence as determined by flow cytometry, the extent of BrdU substitution and the effect of the BrdU on cell growth. We determined that a BrdU concentration of 1 x 10(-5) M resulted in sufficient substitution to quench the fluorescence from 33258 Hoechst by a factor of 4, allowing discrimination between cycling and noncycling cells. The extent of BrdU substitution after growth for 24 hr in this concentration of BrdU was 64%. These data indicate the feasibility of detecting deoxyribonucleic acid synthesis in whole cells using the 33258 Hoechst-BrdU methodology.