コラーゲン沈着におけるフィブロネクチンの役割：フィブロネクチンのゼラチン結合ドメインへのFab 'は、フィブロネクチンとコラーゲン組織の両方を線維芽細胞細胞外マトリックスに阻害します

Diploid線維芽細胞（IMR-90）の細胞外フィブロネクチンおよびコラーゲン組織に対するFibronectin（1981、J。Biol。Chem。256：5583）の60,000 mol wtゼラチン結合ドメイン（1981年、J。Biol。Chem。256：5583）のFAB（Anti-60K）の効果を報告します。抗60k Fab 'は、フィブロネクチン枯渇培地のIMR-90の付着または増殖を阻害しませんでした。免疫前のFab 'で培養された線維芽細胞は、免疫蛍光によりフィブロネクチンとコラーゲンの密な細胞外ネットワークを検出可能であり、抗60K FABは細胞外コラーゲンとフィブロネクチン線維沈着を防止しました。フィブロネクチンとコラーゲンがより低い細胞層に現れ始めたとき、細胞が二重に密になるまで、細胞が二重に密になるまで、マトリックスフィブロネクチンとコラーゲンの沈着は、抗60Kファブを含む培養で減少したままでした。抗60k Fab 'は、固定と染色の24時間前にコンフルエントな培養物に追加され、マトリックスフィブロネクチンまたはコラーゲンに影響を与えなかったため、抗60Kファブは免疫染色を単純にブロックしませんでした。抗60kファブで栽培されたコンフルエントな培養物は、[3H]プロリンと[3H]プロリンと[3H]ヒドロキシプロリンを組み込んだ[3H]プロリンを24時間標識しましたが、細胞層でのヒドロキシプロリン沈着は、ANTI-60KKKによって有意に減少しました。Fab '（0.01未満）。ゼラチンも血漿フィブロネクチンのゼラチン結合フラグメントもマトリックスフィブロネクチンの沈着を阻害しなかったため、細胞外マトリックスコラーゲンはフィブロネクチン沈着の足場を形成するようには見えません。我々の結果は、間質性コラーゲンとフィブロネクチンが相互作用して細胞外マトリックスの線維成分を形成し、フィブロネクチンが正常なコラーゲンの組織に必要であり、in vitroでの線維芽細胞による堆積が必要であることを示唆しています。フィブロネクチンに対するドメイン特異的抗体は、細胞外マトリックス組織およびその他のプロセスにおけるフィブロネクチンの生物学的役割を研究するための強力なツールです。

We report the effect of Fab' (anti-60k) to a 60,000 mol wt gelatin binding domain of fibronectin (1981, J. Biol. Chem. 256:5583) on diploid fibroblast (IMR-90) extracellular fibronectin and collagen organization. Anti-60k Fab' did not inhibit IMR-90 attachment or proliferation in fibronectin-depleted medium. Fibroblasts cultured with preimmune Fab' deposited a dense extracellular network of fibronectin and collagen detectable by immunofluorescence, while anti-60k Fab' prevented extracellular collagen and fibronectin fibril deposition. Matrix fibronectin and collagen deposition remained decreased in cultures containing anti-60k Fab' until cells became bilayered or more dense, when fibronectin and collagen began to appear in lower cell layers. Anti-60k Fab' added to confluent cultures 24 h before fixation and staining had no effect on matrix fibronectin or collagen, so anti-60k Fab' did not simply block immunostaining. Confluent cultures grown in anti-60k Fab' and labeled for 24 h with [3H]proline incorporated identical amounts of [3H]proline and [3H]hydroxyproline, but [3H]hydroxyproline deposition in the cell layer was significantly decreased by anti-60k Fab' (P less than 0.01). Extracellular matrix collagen does not appear to form a scaffold for fibronectin deposition, as neither gelatin nor a gelatin-binding fragment of plasma fibronectin inhibited deposition of matrix fibronectin. Our results suggest that interstitial collagens and fibronectin interact to form a fibrillar component of the extracellular matrix, and that fibronectin is required for normal collagen organization and deposition by fibroblasts in vitro. Domain-specific antibodies to fibronectin are powerful tools to study the biological role of fibronectin in extracellular matrix organization and other processes.