Hoechst 33342による細胞毒性、変異原性およびDNA損傷

Hoechst 33342は、生体中国のハムスター細胞のDNA含有量のフローマイクロフルオリメトリー（FMF）分析に使用でき、比較的非毒性染色レジメンを備えた良好な解像度（変動係数（CVS）6％）を与えます。しかし、色素はDNA合成の非常に効率的な阻害剤であり、V79細胞のDNA合成速度の著しいうつ病は、最適なFMF分解能に必要な濃度よりも10倍少ない濃度で観察されます。無毒で最小限の毒性ホエキスト濃度も、6-チオグアニン耐性によってアッセイされるように、実証可能な突然変異をもたらしました。染色が結合の2つの成分を示唆した後、総染色の約半分が急速に除去されるため、細胞からのHoechstの消失は正常な成長培地に戻りましたが、残りは明らかに細胞分裂によってのみ添加されます。Hoechst 33342を含む細胞は、4度Cで保持されている場合、コントロール細胞よりも急速に死亡し、約100 mWを超える電力で動作する場合、紫外線レーザービームによる不活性化の影響を受けやすくなります。したがって、Hoechst 33342は、生細胞のDNA含有量に関する情報を提供できますが、最小限の毒性、中程度の突然変異、および有意な細胞周期の摂動を犠牲にして提供できます。

Hoechst 33342 can be used for flow microfluorimetry (FMF) analysis of the DNA content of living Chinese hamster cells, giving good resolution (coefficients of variation (CVs) 6%) with relatively nontoxic staining regimens. The dye is, however, a very efficient inhibitor of DNA synthesis, with a marked depression of the DNA synthetic rate for V79 cells observed at concentrations tenfold less than those required for optimal FMF resolution. Nontoxic and minimally toxic Hoechst concentrations also resulted in demonstrable mutation, as assayed by 6-thioguanine resistance. Hoechst disappearance from cells returned to normal growth medium after staining suggests two components of binding, since about half of the total stain is rapidly removed, whereas the rest is apparently diluted only by cell division. Cells containing Hoechst 33342 die more rapidly than control cells when held at 4 degrees C and are also more susceptible to inactivation by the ultraviolet laser beam if operated at approximately greater than 100 mW power. Thus, Hoechst 33342 can provide information about the DNA content of living cells, but at the expense of minimal toxicity, moderate mutation, and significant cell cycle perturbations.