アゴニストとアンタゴニストは、ヒト胚性腎臓293細胞のD2L受容体の高親和性状態を示差的に調節します

放射標識拮抗薬を用いた研究により、アゴニストと拮抗薬の両方が、D2LまたはD2S受容体を発現するためにトランスフェクトされた細胞のD2ドーパミン受容体のアップレギュレーションを誘導することが明らかになりました。アゴニストによって誘発される規制は、敵対者ではなく、cAMPアナログと相乗的であり、アゴニストと拮抗薬の効果のタイムコースの違いが観察されています。これらの発見は、トランスフェクトされたHEK 293細胞におけるD2Lドーパミン受容体の高親和性状態のアゴニストおよび拮抗薬誘発性の調節を調査するために、放射標識アゴニストを使用して拡張されています。アゴニストへの曝露は、高親和性、アゴニストを好む状態での受容体の割合を減少させました。しかし、拮抗薬への曝露は、アゴニストに対する親和性が高い受容体の密度の増加をもたらしました。アゴニストを好む受容体に対するアゴニストと拮抗薬の両方の効果は、遅れなく発生し、時間と用量に依存していました。アゴニストによるフォルスコリン刺激cAMPの蓄積の阻害は、拮抗薬（ - ） - 硫化物への細胞の暴露による影響を受けませんでした。脱感作は、細胞をアゴニストキンピロールに1.5時間曝露した後に見られ、高親和性結合部位の急速な損失は、アデニリルシクラーゼの阻害を媒介するGタンパク質からの受容体の分配を表していることを示唆しています。タンパク質合成阻害剤シクロヘキシミドによる細胞の前処理は、アゴニストに対する親和性の高いキンピロール誘発受容体の喪失をブロックしませんでした。高親和性結合部位に対する（ - ） - 硫化物の効果は、シクロヘキシミドによってブロックされましたが、それは、受容体の総数の増加を誘発するのに十分な時間のために細胞をインキュベートした後にのみブロックされました。（ - ） - スルピリドと短時間細胞をインキュベートした後、アゴニストに対する親和性の高い受容体の数の増加は、シクロヘキシミドの影響を受けませんでした。これらの結果は、拮抗薬への短時間の暴露後のアゴニスト結合の増加は、アデニリルシクラーゼの阻害と結合されていない1つまたは複数のGタンパク質との受容体との相互作用によるものであるのに対し、後の時点でのアゴニスト結合の増加は関連していることを示唆しています。拮抗薬によるアップレギュレーションを伴う。

Studies with radiolabeled antagonists have revealed that both agonists and antagonists induce up-regulation of D2 dopamine receptors in cells transfected to express D2L or D2S receptors. The regulation induced by agonists, but not antagonists, was synergistic with cAMP analogues, and differences in the time courses of the effects of agonists and antagonists have been observed. These findings have been extended by using a radiolabeled agonist to investigate agonist- and antagonist-induced regulation of the high affinity state of the D2L dopamine receptor in transfected HEK 293 cells. Exposure to agonists decreased the proportion of receptors in the high affinity, agonist-preferring state. Exposure to antagonists, however, led to an increase in the density of receptors with a high affinity for agonists. The effects of both agonists and antagonists on the agonist-preferring receptors occurred without a lag and were time and dose dependent. Inhibition of forskolin-stimulated cAMP accumulation by agonists was not affected by exposure of the cells to the antagonist (-)-sulpiride. Desensitization was seen after exposing cells to the agonist quinpirole for 1.5 hr, suggesting that the rapid loss of high affinity binding sites represents an uncoupling of the receptor from the G protein that mediates inhibition of adenylyl cyclase. Pretreatment of cells with the protein synthesis inhibitor cycloheximide did not block the quinpirole-induced loss of receptors with a high affinity for agonists. The effect of (-)-sulpiride on high affinity binding sites was blocked by cycloheximide, but only after incubation of cells for sufficient time to induce an increase in the total number of receptors. After incubation of cells with (-)-sulpiride for a short time, the increase in the number of receptors with a high affinity for agonists was unaffected by cycloheximide. These results suggest that the increase in agonist binding after brief exposure to an antagonist is due to interactions of the receptor with one or more G proteins that are not coupled to inhibition of adenylyl cyclase, whereas the increase in agonist binding at later time points is associated with the antagonist-induced up-regulation.