細胞内病因の研究のための細菌の蛍光標識

細胞内細菌病原体とその真核細胞宿主または標的との相互作用は、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーなどの蛍光ベースの技術でしばしば研究されます。細胞内細菌性病原体L.モノサイトゲン、M。アビウム、M。Tuberculosis、およびS. Tyhimuriumが、フルオロクロムカルボキシ-X-ロダミン（CR）を含むブロスの成長によって標識できるかどうかをテストしました。、およびLucifer Yellow Ch（ly）。リステリアのみが3つのフルオロクロムすべてで標識され、サルモネラはFHのみを占有しましたが、M。aviumとM. tuberculosisはFHとLyによって標識されました。一般に、FHは細菌の成長や生存率に影響を与えませんでしたが、FHは結核の成長を阻害しました。蛍光リステリアと結核菌を使用して、FHおよびLy標識細菌がマクロファージによる食作用後、フローサイトメトリーによる非染色細胞細胞を区別するために十分に明るいことを実証しました。フルオロクロムが宿主細​​胞との細菌の相互作用を変化させる可能性があるかどうかをテストするために、マクロファージによる蛍光リステリアの食作用と、これらの細胞のその後の細菌複製の両方を測定しました。これらの実験では、標識および非標識リステリアはマクロファージによって同様に貪食され、それらの内部で複製する能力が損なわれませんでした。したがって、細菌の蛍光標識のこの方法は、生理学的マクロファージ：細菌の相互作用の研究に役立ちます。

Interactions between intracellular bacterial pathogens and their eukaryotic cellular hosts or targets are often studied with fluorescence-based techniques such as fluorescence microscopy and flow cytometry. We tested whether the intracellular bacterial pathogens L. monocytogenes, M. avium, M. tuberculosis, and S. typhimurium could be labeled by growth in broth containing the fluorochromes carboxy-X-rhodamine (CR), a hydrazine derivative of fluorescein (FH), and Lucifer Yellow CH (LY). Only Listeria were labeled by all three fluorochromes, Salmonella took up only FH, whereas M. avium and M. tuberculosis were labeled by FH and LY. In general, the fluorochromes did not affect bacterial growth or viability, although FH inhibited the growth of M. tuberculosis. Fluorescent Listeria and M. tuberculosis were used to demonstrate that FH- and LY-labeled bacteria were bright enough after phagocytosis by macrophages to distinguish phagocytic from nonphagocytic cells by flow cytometry. To test whether the fluorochromes might alter bacterial interactions with host cells, we measured both phagocytosis of fluorescent Listeria by macrophages and subsequent bacterial replication in these cells. In these experiments, labeled and unlabeled Listeria were phagocytosed similarly by macrophages and were not impaired in their ability to replicate within them. Thus, this method for fluorescence labeling of bacteria is useful for studying physiologic macrophage:bacteria interactions.