CRKLは、慢性骨髄性白血病細胞におけるP210BCR/ABLをパキシリンとリンクします

フィラデルフィア染色体転座は、キメラ癌遺伝子であるBCR/ABLを生成し、慢性骨髄性白血病（CML）を引き起こします。CML患者の原発性好中球では、主要な新規チロシンリン酸化タンパク質は、V-CRK癌遺伝子産物のヒト相同性であるCRKとの全体的な相同性を持つSH2-SH3-SH3リンカータンパク質であるCRKLです。CML細胞からの抗CRKL免疫沈降は、正常細胞ではなく、p210BCR/ABLおよびC-ABLを含むことがわかった。他のいくつかのリンタンパク質も抗CRKL免疫沈降物で検出されました。そのうちの1つは、P210BCR/ABLによってリン酸化されることが以前に示された68 kDa焦点接着タンパク質であるパキシリンと同定されています。GST-CRKL融合タンパク質を使用して、CRKLのSH3ドメインはC-ABLおよびP210BCR/ABLに結合することがわかりましたが、CRKLのSH2ドメインはパキシリンに結合し、CRKLがP210BCR/ABLをパキシリンに物理的にリンクできることを示唆しています。パキシリンには、CRKL-SH2ドメインに結合することに最適であると予測されるアミノ酸配列と一致するTyr-X-X-Pro（Y-X-X-P）モチーフの3つのチロシンが含まれています（位置TYR-31、TYR-118、およびTYR-181）。これらのチロシン残基のそれぞれは、フェニルアラニン残基に変異し、in vitro結合アッセイは、181ではなく181位のパキシリンチロシンがCRKL-SH2結合に関与している可能性が高いことを示しました。これらの結果は、P210BCR/ABL癌遺伝子がCRKLによって造血細胞の局所接着関連タンパク質パキシリンと物理的に関連している可能性があることを示唆しています。この相互作用は、CML細胞の既知の接着欠陥に寄与する可能性があります。

The Philadelphia chromosome translocation generates a chimeric oncogene, BCR/ABL, which causes chronic myelogenous leukemia (CML). In primary neutrophils from patients with CML, the major novel tyrosine-phosphorylated protein is CRKL, an SH2-SH3-SH3 linker protein which has an overall homology of 60% to CRK, the human homologue of the v-crk oncogene product. Anti-CRKL immunoprecipitates from CML cells, but not normal cells, were found to contain p210BCR/ABL and c-ABL. Several other phosphoproteins were also detected in anti-CRKL immunoprecipitates, one of which has been identified as paxillin, a 68-kDa focal adhesion protein which we have previously shown to be phosphorylated by p210BCR/ABL. Using GST-CRKL fusion proteins, the SH3 domains of CRKL were found to bind c-ABL and p210BCR/ABL, while the SH2 domain of CRKL bound to paxillin, suggesting that CRKL could physically link p210BCR/ABL to paxillin. Paxillin contains three tyrosines in Tyr-X-X-Pro (Y-X-X-P) motifs consistent with amino acid sequences predicted to be optimal for binding to the CRKL-SH2 domain (at positions Tyr-31, Tyr-118, and Tyr-181). Each of these tyrosine residues was mutated to a phenylalanine residue, and in vitro binding assays indicated that paxillin tyrosines at positions 31 and 118, but not 181, are likely to be involved in CRKL-SH2 binding. These results suggest that the p210BCR/ABL oncogene may be physically linked to the focal adhesion-associated protein paxillin in hematopoietic cells by CRKL. This interaction could contribute to the known adhesive defects of CML cells.