Thermus aquaticus DNAポリメラーゼの5'-3 'エキソヌクレアーゼの不活性化

Thermus aquaticus（Taq）DNAポリメラーゼ酵素（Taq Pol I）の遺伝子を変異誘入し、酵素活性のために62の候補クローンをスクリーニングしました。クローンの2つは、5'-3 'エキソヌクレアーゼ活性と正常なDNAポリメラーゼ活性を非常に減少させた酵素（ *Taq-3および *Taq-5）を発現しました。これらの2つの酵素は、TAQ Pol Iと同様の熱回復と貯蔵の安定性を示し、PCRで同様の効果を示しました。ポリメラーゼの加工性は、単一の鎖DNAにアニールされたエンドラベルプライマーの拡張を測定することにより、およびPCR法によって比較されました。*taq-3および *taq-5の加工性は、最初の290アミノ酸がないため、5'-3 'エキソヌクレアーゼが不足しているTaq pol IよりもTaq Pol I（50-80ヌクレオチド）に類似しており、より加工性がありました。（Stoffel Fragment）。結果は、Taq Pol I（Arg-25およびArg-74）の正常な5'-3 'エキソヌクレアーゼ活性に必要な2つのアミノ酸を示しています。

The gene for Thermus aquaticus (Taq) DNA polymerase enzyme (Taq Pol I) was mutagenized and sixty-two candidate clones were screened for enzyme activity. Two of the clones expressed enzymes (*Taq-3 and *Taq-5) that showed very reduced 5'-3' exonuclease activity and normal DNA polymerase activity. These two enzymes showed heat resitance and storage stability similar to Taq Pol I and had similar effectiveness in PCR. Processivity of the polymerases was compared by measuring the extension of an end-labeled primer annealed to a single stranded DNA, as well as by a PCR method. The processivity of *Taq-3 and *Taq-5 was similar to Taq Pol I (50-80 nucleotides) and more processive than a Taq Pol I deficient in the 5'-3' exonuclease due to absence of the first 290 amino acids (Stoffel fragment). The results indicate two amino acids which are required for normal 5'-3' exonuclease activity in Taq Pol I (Arg-25 and Arg-74).