ヒトTATA結合タンパク質のN末端ドメインは、TATA含有RNAポリメラーゼIIおよびIIIプロモーターからの転写に役割を果たします。

真核生物では、TATAボックス結合タンパク質（TBP）は、3つのクラスの核RNAポリメラーゼすべての転写開始複合体の不可欠な成分です。この研究では、3つのモノクローナル抗体（MAB）を使用して、RNAポリメラーゼ（POL）I、IIおよびIIIプロモーターからの転写開始におけるヒトTBPのN末端領域の役割を調査しました。各抗体は、ヒトTBPのN末端ドメインに明確なエピトープを認識します。これらの抗体は、異なるクラスのプロモーターからの転写に異なる影響に影響することを実証します。1つの抗体、Mab1c2、およびそのエピトープを含む合成ペプチドは、Pol IIまたはPol IIIによって転写されたかどうかに関係なく、Tataのレスプロモーターからではなく、タタを含むin vitro転写から選択的に阻害されました。一方、Pol Iによる転写は影響を受けませんでした。他の2つの抗体とそれぞれのエピトープペプチドは、テストしたプロモーターのいずれからの転写に影響しませんでした。追加実験の順序は、MAB1C2がTATAボックスまたはTBP-TFIIA-TFIIB複合体の形成へのTBPの結合を妨げなかったのではなく、事前発現複合体形成のその後のステップを阻害したことを示しています。これらのデータは、ヒトTBPのN末端ドメイン内の定義された領域が、TATA含有の機能的な事前発現複合体のアセンブリに必要な特定のタンパク質間相互作用に関与している可能性があるが、TATAのないプロモーターには関与している可能性があることを示唆しています。

In eukaryotes, the TATA box binding protein (TBP) is an integral component of the transcription initiation complexes of all three classes of nuclear RNA polymerases. In this study we have investigated the role of the N-terminal region of human TBP in transcription initiation from RNA polymerase (Pol) I, II and III promoters by using three monoclonal antibodies (mAbs). Each antibody recognizes a distinct epitope in the N-terminal domain of human TBP. We demonstrate that these antibodies differentially affect transcription from distinct classes of promoters. One antibody, mAb1C2, and a synthetic peptide comprising its epitope selectively inhibited in vitro transcription from TATA-containing, but not from TATA-less promoters, irrespective of whether they were transcribed by Pol II or Pol III. Transcription by Pol I, on the other hand, was not affected. Two other antibodies and their respective epitope peptides did not affect transcription from any of the promoters tested. Order of addition experiments indicate that mAb1C2 did not prevent binding of TBP to the TATA box or the formation of the TBP-TFIIA-TFIIB complex but rather inhibited a subsequent step of preinitiation complex formation. These data suggest that a defined region within the N-terminal domain of human TBP may be involved in specific protein-protein interactions required for the assembly of functional preinitiation complexes on TATA-containing, but not on TATA-less promoters.