クロマー血液型の表現型における減衰加速因子の発現の低下または存在の分子基盤

ヒト赤血球血液型システムクロマーは、細胞とホスファチジルイノシトールに固定された膜タンパク質である減衰加盟因子（DAF; CD55）に存在する高感度と低吸気抗原で構成されています。クローマーの表現型DR（A-）およびINABでは、それぞれDAFの発現が減少または存在しません。この研究では、エプスタイン-BARRウイルス変換リンパ芽球細胞株から得られたゲノムDNAおよびRNA/cDNAのポリメラーゼ連鎖反応増幅によるDAF発現の減少の分子基盤を調査しました。INAB propositusの配列分析では、DAF遺伝子のエクソン2とcDNAの対応する位置であるG314-> AでTRP53->停止をもたらす単一のヌクレオチド置換が示されました。アミノ末端近くのこの切り捨ては、INAB表現型に表面DAFが完全に存在しないことを説明しています。KZを含む2人のDR（A-）の個人についても同様の分析が行われました。KZは、以前はINAB表現型であると報告されていましたが、現在では免疫化学的および血清学的方法によってDR（A-）表現型であることが示されています。DAF遺伝子のエクソン5であるC649-> tの結果、Ser165 - > Leuには、単一のヌクレオチド変化が見つかりました。ただし、2種のcDNAが見つかりました。1つは、単一のアミノ酸変化を伴うフルレングスDAFをコードし、より豊富な種が44ヌクレオチド欠失を有する種が見つかりました。44ヌクレオチドの欠失には、単一の多型部位が含まれており、DR（A-）対立遺伝子に不可解な分岐点を作成し、下流の潜在的な潜在性アクセプタースプライス部位の使用につながります。これにより、読み取りフレームがシフトし、膜の固定を排除する時期尚早の停止コドンにつながります。したがって、DR（A-）表現型の単一点変異は、代替スプライシングの新規使用をもたらし、この表現型で見られる抗原性とDAF発現の減少の両方について分子的説明を提供します。

The human erythrocyte blood group system Cromer consists of high-incidence and low-incidence antigens that reside on decay-accelerating factor (DAF; CD55), a glycosyl-phosphatidylinositol-anchored membrane protein that regulates complement activation on cell surfaces. In the Cromer phenotypes Dr(a-) and Inab there is reduced or absent expression of DAF, respectively. This study investigated the molecular basis of the reduced DAF expression by polymerase chain reaction amplification of genomic DNA and RNA/cDNA obtained from Epstein-Barr virus-transformed lymphoblastoid cell lines. Sequence analysis of the Inab propositus showed a single nucleotide substitution in exon 2 of the DAF gene and at the corresponding position in the cDNA, G314-->A resulting in Trp53-->Stop. This truncation near the amino terminus explains the complete absence of surface DAF in the Inab phenotype. A similar analysis was performed for two Dr(a-) individuals, including KZ, who was previously reported to be Inab phenotype but is now shown by immunochemical and serologic methods to be Dr(a-) phenotype. A single nucleotide change was found in exon 5 of the DAF gene, C649-->T resulting in Ser165-->Leu, which we had previously shown to lead to loss of the Dra epitope. However, two species of cDNA were found, one encoding full-length DAF with the single amino acid change and the more abundant species having a 44-nucleotide deletion. The 44 nucleotide deletion includes the single polymorphic site, which creates a cryptic branch point in the Dr(a-) allele that leads to use of a downstream cryptic acceptor splice site. This shifts the reading frame and leads to a premature stop codon that precludes membrane anchoring. Thus, the single point mutation in the Dr(a-) phenotype results in a novel use of alternative splicing and provides a molecular explanation for both the antigenicity and the reduced DAF expression seen in this phenotype.