ポリ - リジンとポリデオキシグアノシンの間のアセトアルデヒド誘発架橋の形成と安定性

アセトアルデヒド誘発DNAタンパク質架橋（DPXL）のアミノ酸残基とヌクレオシド特異性は、修正フィルター結合アッセイを使用して研究されました。アセトアルデヒド誘発PUC13プラスミドDNA-CALF胸腺ヒストン架橋形成の40％阻害は、50 mMリジン（遊離塩基）の添加により達成されましたが、アルギニンは濃度の架橋形成に150 mmに影響を与えることができませんでした。リジン（Poly-Lys5）のポリマー（5マー）は、アセトアルデヒド誘発プラスミド架橋形成のヒストンを代用することができ、等モル濃度で等しく効果的でした。デオキシグアノシン（ポリ-DG6）（しかし、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、またはチミジンではない）のホモポリマー（6メース）は、子牛胸腺ヒストンまたはポリス5をタンパク源としてポリス5を使用して、アセトアルデヒド誘発DPXL形成の効率的な基質として機能しました。ポリDG6とポリリス5の間のアセトアルデヒド誘発架橋は急速に形成されましたが、37度C（半減期または1.5〜2時間）で不安定でした。これらの架橋の安定性は、37度Cで5.5〜9.0の範囲でpHの影響を受けませんでした。ここで提示された結果は、デオキシグアノシンとリジンの不安定な複合体がin vitroでアセトアルデヒドによって形成されたDPXLの大部分を構成することを示唆しています。

The amino acid residue and nucleoside specificity of acetaldehyde-induced DNA-protein crosslinks (DPXLs) were studied using a modified filter binding assay. A 40% inhibition of acetaldehyde-induced pUC13 plasmid DNA-calf thymus histone crosslink formation was achieved by addition of 50 mM lysine (free base), while arginine was unable to affect crosslink formation at concentrations to 150 mM. Polymers (5-mers) of lysine (poly-lys5) were able to substitute for histones in acetaldehyde-induced plasmid crosslink formation, being equally effective at equimolar concentrations. Homopolymers (6-mers) of deoxyguanosine (poly-dG6) (but not deoxyadenosine, deoxycytidine or thymidine) served as an efficient substrate for acetaldehyde-induced DPXL formation, using either calf thymus histones or poly-lys5 as the protein source. Acetaldehyde-induced crosslinks between poly-dG6 and poly-lys5 were formed rapidly, but were unstable at 37 degrees C (a half-life or 1.5-2 h). Stability of these crosslinks was unaffected by pH at a range of 5.5-9.0 at 37 degrees C for 2 h. Results presented here suggest that unstable complexes of deoxyguanosine and lysine constitute a major portion of the DPXLs formed by acetaldehyde in vitro.