CSKの過剰発現は、NHE-3の酸誘発性活性化を阻害します

オポッサム腎臓OKP細胞は、NHE-3（Na+/H+交換体3の場合）によってコードされる頂端膜Na+/H+アンチポーターを発現し、腎近位尿細管頂端膜Na+/H+アンチポーターと多くの点で類似しています。24時間酸培地中のOKP細胞の慢性インキュベーションは、Na+/H（+） - アンチポーター活性とNHE-3 mRNAの存在量を増加させます。Na+/H（+） - アンチポーター活性の増加は、プロテインキナーゼC/プロテインキナーゼA阻害剤であるH7によって予防されませんでしたが、チロシンキナーゼ阻害剤であるハービマイシンAによって予防されました。酸培地中の細胞のインキュベーションC-SRC活性は増加し、これはハービマイシンAによって阻害されました。キナーゼは、OKP細胞で過剰発現しました。CSKを過剰発現する3つのクローンでは、Na+/H（+） - アンチポーター活性とNHE-3 mRNAの存在量の酸誘発性の増加が阻害されました。これらのクローンでは、Na+/H（+） - アンチポーター活性の酸性活性化の阻害は、C-SRCの酸活性化の阻害と並行しています。Herbimycin AまたはCSKの過剰発現は、Na+/H（+） - アンチポーター活性のデキサメタゾン誘発性の増加を阻害しませんでした。これらの研究は、pHの減少がC-SRCを活性化し、SRCファミリー非受容体タンパク質 - チロシンキナーゼがNHE-3の酸活性化に重要な役割を果たすことを示しています。

Opossum kidney OKP cells express an apical membrane Na+/H+ antiporter that is encoded by NHE-3 (for Na+/H+ exchanger 3) and is similar in many respects to the renal proximal tubule apical membrane Na+/H+ antiporter. Chronic incubation of OKP cells in acid medium for 24 hr increases Na+/H(+)-antiporter activity and NHE-3 mRNA abundance. The increase in Na+/H(+)-antiporter activity was not prevented by H7, a protein kinase C/protein kinase A inhibitor, but was prevented by herbimycin A, a tyrosine kinase inhibitor. Incubation of cells in acid medium increased c-src activity, and this was inhibited by herbimycin A. To determine the role of the src family of nonreceptor protein-tyrosine kinases, Csk (for carboxyl-terminal src kinase), a physiologic inhibitor of these kinases, was overexpressed in OKP cells. In three clones overexpressing csk, acid-induced increases in Na+/H(+)-antiporter activity and NHE-3 mRNA abundance were inhibited. In these clones, inhibition of acid activation of Na+/H(+)-antiporter activity paralleled inhibition of acid activation of c-src. Neither herbimycin A nor overexpression of csk inhibited dexamethasone-induced increases in Na+/H(+)-antiporter activity. These studies show that decreases in pH activate c-src and that the src family nonreceptor protein-tyrosine kinases play a key role in acid activation of NHE-3.