pbluescriptから派生した便利なクローニングと式のベクトルの新しいセット

Pbluescript（Stratagene、La Jolla、CA、USA）に由来する新しいクローニングベクトルのセットが提示されています。Pbluescriptのアンピシリン耐性エンコード遺伝子（APR）は、カナマイシン（KMR）またはテトラサイクリン（TCR）に対する耐性をコードする遺伝子に置き換えられています。非常にハイコピー番号（500-700コピー/染色体）をPBLUEScriptに付与するDNA複製（ORI）の起源は、PBR322 ORI（15-20コピー/染色体）またはP15A ORI（10-に置き換えられました。12コピー/染色体）[Sambrook et al。：分子クローニング。実験室マニュアル、第2版。Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、NY、1989]。したがって、異なる薬物選択マーカーと低、中程度、または高プラスミドのコピー番号を備えた8つの新しいベクターが作成され、互いに互換性があり（Cole1 oriとp15a ori）、互いに交換するために選択できます。これらのベクトルは、ARAオペロンのプロモーターとARACリプレッサー/アクティベーターに基づいた発現カセットの挿入によりさらに修正されました。これにより、高レベルの発現、非常に厳しい調節、非常に安価な誘導が可能になります。同じ細胞内の1つまたは2つの遺伝子の高レベルの発現が実証されています。

A new set of cloning vectors derived from pBlueScript (Stratagene, La Jolla, CA, USA) is presented. The ampicillin-resistance-encoding gene (ApR) of pBlueScript has been replaced by genes encoding resistance to either kanamycin (KmR) or tetracycline (TcR). The origin of DNA replication (ori), conferring to pBlueScript a very high-copy-number (500-700 copies/chromosome), has been replaced by the pBR322 ori (15-20 copies/chromosome) or the P15A ori (10-12 copies/chromosome) [Sambrook et al.: Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]. Therefore, eight new vectors with different drug selection markers and low, medium or high plasmid copy-number were created which are compatible with each other (ColE1 ori and P15A ori) and can be selected to replace one another. These vectors were further modified by the insertion of an expression cassette based on the promoter and AraC repressor/activator of the ara operon, which allows high-level expression, extremely tight regulation and very inexpensive induction. High-level expression of one or two genes within the same cell is demonstrated.