カンジダアルビカンスのメタロペプチダーゼの精製と特性評価

新しいアミノペプチダーゼは、L-アルギニン7-アミノ-4-メチルクマリンを切断する能力に基づいて、カンジダアルビカンスの細胞質100,000 g抽出物からの高性能液体クロマトグラフィーによって精製されました。精製係数は36で、収量は20％でした。天然の酵素にはmolがありました。還元条件の存在下または非存在下でSDS-PAGEによって実証された52 kDaのWTは、4.3の等電点を示しました。アミノペプチダーゼは、cのミカエリス定数であるpH 7.2で最適な活性を示しました。L-ARG-AMCのために、19 mm AMCの50マイクロームとVmaxが放出された/min/mgのタンパク質を放出しました。この酵素は、スペクトロフルオリメトリック法で示されているように、低親和性L-ロイシン-7-アミノ-4-メチルクマリンで切断することが示されました。酵素は、特定のメタロ酵素阻害剤-EDTAおよびO-フェナントロリンによって強く阻害されました。さらに、他のC. albicans臨床分離株およびその他のカンジダ属で類似または同一の酵素が発生するという証拠があります。

A novel aminopeptidase was purified by high performance liquid chromatography from a cytosoluble 100,000 g extract of Candida albicans on the basis of its ability to cleave L-arginine 7-amino-4-methylcoumarin. The purification factor was 36 and the yield was 20%. The native enzyme had a mol. wt of 52 kDa as demonstrated by SDS-PAGE in the presence or absence of reducing conditions and exhibited an iso-electric point of 4.3. The aminopeptidase showed optimum activity at pH 7.2, a Michaelis constant of c. 50 microM and a Vmax at 19 mM AMC released/min/mg of protein for L-Arg-AMC. This enzyme was shown to cleave at low affinity L-leucine-7-amino-4-methylcoumarin as demonstrated by the spectrofluorimetric method. The enzyme was strongly inhibited by specific metallo-enzyme inhibitors-EDTA and o-phenanthroline. Furthermore, there is evidence that a similar or identical enzyme occurs in other C. albicans clinical isolates and other Candida spp.