脂質活性化因子とCTP：ホスホコリンサイトジドイリルトランスフェラーゼの両親媒性ヘリカルドメインとの関連は、CTPの酵素の親和性を増加させることにより触媒を加速します。

脂質モジュレーターによる酵素活性の調節のための生化学的メカニズムとCTP：ホスホコリンサイト酸酸素産物（CT）の両親媒性アルファヘリカルドメイン（CT）の役割は、野生型タンパク質の運動特性を分析することにより、調査を調査しました。バキュロウイルス発現システム。CT [Delta 312-367]変異タンパク質は、脂質モジュレーターによる陽性と陰性の両方の調節とともに、カルボキシル末端リン酸化ドメインを欠いており、高い触媒活性を保持していました。CT [Delta 257-367]の削除は、さらに3つの連続した両性麻痺性アルファヘリカルリピートを含む領域を削除しました。CT [Delta 257-367]変異タンパク質は、昆虫または哺乳類細胞のいずれかで発現した場合、CTまたはCT [Delta 312-367]と比較して比較的低い特定の活性を示しました。ただし、CT [Delta 257-367]活性は、脂質調節因子による刺激または阻害のいずれかに耐抵抗性がありました。脂質活性化因子は、CTPのkmを存在下の24.7 mmから0.7 mmに減少させることにより、CT活性を促進しました。ホスホコリンのKMは、脂質活性化因子の影響を受けませんでした。CT [Delta 257-367]の活性は、脂質活性化因子の非存在下での野生型CTの活性に匹敵し、CT [Delta 257-367]のCTP kmは13.9 mmでした。CT [Delta 231-367]変異体の酵素特性は、CT [257-367]変異体によって示された変異体に匹敵し、残基231から257の除去は酵素の脂質調節に追加の影響を与えなかったことを示しています。したがって、CTでの残基257と312の間の領域は、CTで脂質調節を付与するために必要でした。また、脂質を活性化するタンパク質の領域との関連は、CTPの酵素の親和性を高めることにより触媒を刺激しました。

The biochemical mechanism for the regulation of enzyme activity by lipid modulators and the role of the amphipathic alpha-helical domain of CTP:phosphocholine cytidylyltransferase (CT) was investigated by analyzing the kinetic properties of the wild-type protein and two truncation mutants isolated from a baculovirus expression system. The CT[delta 312-367] mutant protein lacked the carboxyl-terminal phosphorylation domain and retained high catalytic activity along with both positive and negative regulation by lipid modulators. The CT[delta 257-367] deletion removed in addition the region containing three consecutive amphipathic alpha-helical repeats. The CT[delta 257-367] mutant protein exhibited a significantly lower specific activity compared to CT or CT[delta 312-367] when expressed in either insect or mammalian cells; however, CT[delta 257-367] activity was refractory to either stimulation or inhibition by lipid regulators. Lipid activators accelerated CT activity by decreasing the Km for CTP from 24.7 mM in their absence to 0.7 mM in their presence. The Km for phosphocholine was not affected by lipid activators. The activity of CT[delta 257-367] was comparable to the activity of wild-type CT in the absence of lipid activators and the CTP Km for CT[delta 257-367] was 13.9 mM. The enzymatic properties of the CT[delta 231-367] mutant were comparable to those exhibited by the CT[257-367] mutant indicating that removal of residues 231 through 257 did not have any additional influence on the lipid regulation of the enzyme. Thus, the region between residues 257 and 312 was required to confer lipid regulation on CT, and the association of activating lipids with this region of the protein stimulated catalysis by increasing the affinity of the enzyme for CTP.