オリゴヌクレオチド標識リパーゼは、新しい敏感なハイブリダイゼーションプローブとしてリパーゼをバイオアッセイとバイオセンサーでの使用として使用しました

放射性標識ポリヌクレオチドプローブは、特定のハイブリダイゼーションにより相補性核酸の検出に広く採用されています。過去数年以内に、不安定で危険な同位体を避けるために、酵素標識プローブを使用してさまざまな方法が開発されました。これらのアッセイは、測光、蛍光、化学発光に基づいており、放射性プローブの使用を克服するのに役立ちました。非放射性DNA検出システムの性能を向上させるために、標識酵素は、15〜25 bpの長いDNA-DNA二重鎖（TM = 50-70度C）の形成を可能にするハイブリダイゼーション条件下で安定したままでなければなりません。したがって、ハイブリダイゼーション混合物と高温の組成により、不安定なホスファターゼとペルオキシダーゼコンジュゲートの使用は避ける必要があります。特別な需要に適合するためにさまざまな加水分解酵素をスクリーニングすることにより、真菌のリパーゼが最も実用的であることが判明しました。彼らは、非常に高い離職率、数年間の室温での安定性、労働条件下での熱安定性、およびさまざまな色素性、蛍光、電気化学活性基質の簡単な設計により、高い感度を提供します。アミノ基で修飾されたいくつかのタイプのシラン化された酸化および未修飾の金属センサーと、オリゴヌクレオチドの固定化に使用された標準的なマイクロティタルプレートが使用されました。リパーゼ溶解したオリゴヌクレオチドプローブを使用したサンドイッチハイブリダイゼーションと、溶液中の急速なハイブリダイゼーションと組み合わせたマイクロタイトルプレートまたはセンサー表面の末端固定化キャプチャDNAは、DNA検出システムの性能を簡素化し、改善します。

Radiolabelled polynucleotide probes have been employed extensively for the detection of complementary nucleic acids by specific hybridization. Within the last few years, various methods have been developed using enzyme-labelled probes to avoid unstable and hazardous isotopes. These assays, based on photometry, fluorescence, and chemiluminescence, have helped to overcome the use of radioactive probes. To increase the performance of a non-radioactive DNA detection system, the labelling enzyme should remain stable under hybridization conditions which allow the formation of a 15-25 bp long DNA-DNA duplex (Tm = 50-70 degrees C). Therefore, the use of unstable phosphatase and peroxidase conjugates must be avoided due to the composition of the hybridization mixture and the high temperature. By screening various hydrolytic enzymes to fit the special demands, fungal lipases turned out to be the most practical. They offer high sensitivity due to an extremely high turnover number, stability at room temperature for several years, thermostability under working conditions and an easy design of various chromogenic, fluorescent and electrochemical active substrates. Several types of silanized, oxidized and unmodified metal sensors and also standard microtitre plates modified with amino groups were used for the immobilization of oligonucleotides. A sandwich hybridization using the lipase-labelled oligonucleotide probe and a terminal immobilized capture DNA on a microtitre plate or sensor surface combined with a rapid hybridization in solution simplifies and improves the performance of the DNA detection system.