メサンギアル細胞におけるエンドセリン受容体のトロンビンを介したダウンレギュレーションは、中性エンドペプチダーゼ活性のダウンレギュレーションと一致しています

エンドセリン（ET）受容体のトロンビンを介したダウンレギュレーションは、ラット糸球体メサンギアル細胞で研究されました。メサンギウム細胞とトロンビン（10 nM）との一晩インキュベーションにより、ET受容体の数が大幅に減少し（67％）、親和性は変化しませんでした。これらの細胞からのmRNAの北部分析は、ETA受容体メッセージの対応する減少を示しました。このようなET受容体の減少は、合成の増加および/または分解の減少によって引き起こされるETレベルの増加に起因する可能性があります。トロンビンは内皮細胞およびメサンギアル細胞のET産生を刺激することが以前に報告されています。ETは腎臓の高レベルで存在する中性エンドペプチダーゼ（NEP）によって分解されることが知られているため、NEP活性に対するトロンビンの潜在的な効果を評価しました。10 nMトロンビンで治療してから16時間および24時間後にメサンギア細胞でNEP活性が低下しました。この効果は、トロンビン活性の阻害剤であるヒルディンの存在下でトロンビンによる治療後にNEP活性が変化しなかったため、トロンビンに特異的でした。NEP活性のトロンビンを介した減少は、それぞれ西部および北部の分析によって決定されるように、NEPタンパク質およびmRNAレベルの減少と相関していた。ET受容体のトロンビンを介した減少が機能的な結果を持っているかどうかを判断するために、ET-1刺激された細胞内カルシウムの動員が測定されました。10 nMトロンビンとの一晩インキュベーションは、ET刺激された細胞内カルシウム動員の有意な阻害をもたらしました。トロンビンの前処理はメサンギアル細胞におけるバソプレシン刺激された細胞内カルシウム動員に影響を与えなかったため、この効果はETに対して特異的でした。これらの結果は、ET受容体のトロンビンを介したダウンレギュレーションが、NEPのダウンレギュレーションとET合成の報告の増加に起因するETのトロンビン刺激の増加によるものであることを示しています。さらに、ET-1によるメサンギアル細胞の前処理は、血管抑制またはトロンビン媒介反応に影響を与えることなく、ET受容体数とET-1を介した細胞内カルシウム放出（84％）の有意な減少（85％）を引き起こしました。

Thrombin-mediated down-regulation of endothelin (ET) receptors was studied in rat glomerular mesangial cells. Overnight incubation of mesangial cells with thrombin (10 nM) resulted in a significant decrease (67%) in the number of ET receptors, with no change in affinity. Northern analysis of the mRNA from these cells showed a corresponding decrease in the ETA receptor message. Such a decrease in ET receptors could result from an increase in ET levels caused by an increase in synthesis and/or a decrease in degradation. It has been previously reported that thrombin stimulates ET production in endothelial and mesangial cells. Because ET is known to be degraded by neutral endopeptidase (NEP), which is present at high levels in the kidney, the potential effects of thrombin on NEP activity were evaluated. There was a decrease of NEP activity in mesangial cells at 16 and 24 hr after treatment with 10 nM thrombin. This effect was specific for thrombin, because NEP activity was not altered after treatment with thrombin in the presence of hirudin, an inhibitor of thrombin activity. The thrombin-mediated decrease in NEP activity correlated with a decrease in NEP protein and mRNA levels, as determined by Western and Northern analyses, respectively. To determine whether the thrombin-mediated decrease in ET receptors had a functional corollary, ET-1-stimulated intracellular calcium mobilization was measured. Overnight incubation with 10 nM thrombin resulted in a significant inhibition of ET-stimulated intracellular calcium mobilization. This effect was specific for ET, because thrombin pretreatment did not affect vasopressin-stimulated intracellular calcium mobilization in mesangial cells. These results indicate that the thrombin-mediated down-regulation of ET receptors is due, in part, to a thrombin-stimulated increase in ET resulting from the down-regulation of NEP and the reported increase in ET synthesis. In addition, pretreatment of mesangial cells with ET-1 caused a significant decrease (85%) in ET receptor number and ET-1-mediated intracellular calcium release (84%), without affecting vasopressin- or thrombin-mediated responses.