安定したトランスフェクション上のレポーター遺伝子発現TATAボックスまたはTATAボックスとSP1サイトのみが遺伝子に5 '存在する場合

哺乳類細胞培養の安定したトランスフェクションのためのエピソーマプラスミドが構築され、高度に切り捨てられたプロモーターのすぐ下流のG418耐性（NEO）遺伝子がありました。これらのプラスミドは、選択可能なマーカーとして機能的な吸湿性耐性遺伝子（HYG）を持っていました。驚くべきことに、LTK細胞では、HeLa細胞ではなく、おそらく約1 kbの上流からNEO遺伝子に隣接するプロモーター要素、再スルー転写、NEO遺伝子のほぼ効率的な発現を与えたこれらのBKウイルスベースのプラスミドを安定してトランスフェクトした。フルレングスプロモーターを備えたHyg遺伝子のように、すぐに上流です。トランスフェクト化プラスミドにエピソーム維持のためのエプスタインバーウイルス（EBV）DNA配列が含まれており、複数のSP1部位とTATAボックスがNEO遺伝子に唯一のプロモーター要素5 'として含まれていた場合、HELAトランスフェクタの約3〜9％のみがG418耐性でした。（G418R）。これらのプロモーター要素5 'をNEO遺伝子に欠ける類似のプラスミドを含むトランスフェクションでは、G418Rコロニーは見られませんでした。G418R表現型の確立は、おそらくプラスミドDNAの好ましい染色体部位への統合が必要であり、Tata Box Plus SP1部位の存在によって、最近のプロモーターとしての存在によって支援されました。EBV型プラスミドで得られたほとんどのHeLaトランスフェクタントクローンの検出可能なG418耐性がないことは、高プラスミドのコピー数でさえ、TATAボックスと6つのSP1部位がNEO遺伝子のすぐ上流に存在した場合でも、これらがこれらを示していることを示しています。in vivoでのかなりの遺伝子発現には元素が十分ではなく、これはNEO遺伝子の発現を増強できるDNA再編成を研究するための適切なモデルシステムであることです。

Episomal plasmids for stable transfection of mammalian cell cultures were constructed that have a G418-resistance (neo) gene immediately downstream of a highly truncated promoter. These plasmids had a function hygromycin-resistance gene (hyg) as a selectable marker. Surprisingly, in LTK- cells, but not HeLa cells, stably transfected with these BK virus-based plasmids having no promoter elements adjacent to the neo gene, readthrough transcription, probably from about 1 kb upstream, gave almost as efficient expression of the neo gene as of the hyg gene with a full-length promoter immediately upstream. When the transfecting plasmids contained Epstein-Barr virus (EBV) DNA sequences for episomal maintenance and had multiple Sp1 sites and a TATA box as the only promoter elements 5' to the neo gene, only about 3-9% of HeLa transfectants were G418 resistant (G418R). In transfections with analogous plasmids lacking these promoter elements 5' to the neo gene, no G418R colonies were seen. The establishment of the G418R phenotype probably required integration of plasmid DNA into favorable chromosomal sites and was aided by the presence of the TATA box plus Sp1 sites as a subminimal promoter. The absence of detectable G418-resistance in most of the HeLa transfectant clones obtained with EBV-type plasmids, even at a high plasmid copy number and even when a TATA box and six Sp1 sites were present immediately upstream of the neo gene, indicates that these elements do not suffice for appreciable gene expression in vivo and that this is a suitable model system for studying DNA rearrangements that can potentiate expression of the neo gene.