大腸菌由来のジヒドロ葉酸還元酵素のシステインフリー型の熱展開における安定した中間体の検出

大腸菌由来のジヒドロ葉酸還元酵素のシステインフリー変異体（C85S/C152E、DES-CYS）の可逆的な温度誘導展開は、吸光度と極地および近縁球の両方のcircular筋双子症分野で研究されています。3つの遷移曲線すべての非同時性は、pH 7.8で39度Cの近くに人口の多い部分的に折り畳まれた形の存在を示しました。この中間体は実質的な二次構造を保持し、溶媒からの5人のトリプトファンの1つ以上を部分的に除外します。しかし、中間体はその芳香族残基の周りに特定の三次梱包を失いました。エンタルピー、エントロピー、および熱容量の増加は、ネイティブ/中間および中間/折り畳まれた遷移の両方で観察されます。これらのパラメーターの変更の大部分は、最初の遷移で発生します。これらの結果は、Des-Cysジヒドロ葉酸レダクターゼの熱展開反応には、溶融球の特性に似た安定した中間体が含まれることを示唆しています。

The reversible temperature-induced unfolding of a cysteine-free mutant (C85S/C152E, des-Cys) of dihydrofolate reductase from Escherichia coli has been studied by absorbance and by both far- and near-ultraviolet circular dichroism spectroscopies. The non-coincidence of all three transition curves demonstrated the existence of a highly populated partially-folded form near 39 degrees C at pH 7.8. This intermediate retains substantial secondary structure and partially excludes one or more of the five tryptophans from solvent; however, the intermediate has lost specific tertiary packing around its aromatic residues. Increases in enthalpy, entropy, and heat capacity are observed for both the native/intermediate and intermediate/unfolded transitions; the majority of the changes in these parameters occurs in the first transition. These results suggest that the thermal unfolding reaction of des-Cys dihydrofolate reductase involves a stable intermediate whose properties resemble those of a molten globule.