カルボキシペプチダーゼY消化と高速原子爆撃質量分析によるC末端アミノ酸アミドの同定

ペプチド中のC末端アミノ酸アミドの同定のために、カルボキシペプチダーゼY消化と高速原子爆撃（FAB）質量分析の併用方法が説明されています。カルボキシペプチダーゼYには、同じ消化緩衝症の状態でエキソペプチダーゼ活性と同様にアミダゼ活性があります。この概念に基づいて、C末端アミノ酸アミドを明確かつ簡単に識別できる新しい手法を開発します。この方法では、以前の方法で発生するいくつかの複雑なステップの必要性がなくなりますが、感度を向上させ、分子量の違いによりアミノ酸アミドの正確な識別を可能にします。カルボキシペプチダーゼY消化ペプチドの分析は、放出された遊離アミノ酸アミドではなく、高速原子爆撃質量分析によって実行されました。C末端アミノ酸アミド測定における高速原子爆撃質量分析による切り捨てられたペプチドの使用は、解放されたアミノ酸アミドの分析よりもいくつかの利点を与えます。アラントスタチンI（LEU-NH2）、アルファメラノサイト刺激ホルモン（VAL-NH2）、およびラナテンシン（MET-NH2）のC末端アミノ酸アミドは、ペプチドあたり0.90-2.3 nmolのレベルで明確に測定されます。このアプローチは、以前のアプローチとはまったく異なる原則に基づいています。

The combination method of carboxypeptidase Y digestion and fast atom bombardment (FAB) mass spectrometry is described for the identification of C-terminal amino acid amides in peptides. Carboxypeptidase Y has amidase activity as well as exopeptidase activity in the same digestion buffer condition. Based on this concept, we develop a new technique which can definitively and easily identify the C-terminal amino acid amides. This method obviates the need for several complicated steps occurring in previous methods, but improves sensitivity, and enables exact identification of the amino acid amide by the difference of molecular mass. Analyses of carboxypeptidase Y digested peptides, not liberated free amino acid amides, were carried out by fast atom bombardment mass spectrometry. The use of truncated peptides by fast atom bombardment mass spectrometry in C-terminal amino acid amide determination gives several advantages over analyses of the liberated amino acid amides. The C-terminal amino acid amides of Allantostatin I (Leu-NH2), alpha-Melanocyte Stimulating Hormone (Val-NH2), and Ranatensin (Met-NH2) are unequivocally determined at a level of 0.90-2.3 nmol per peptide. This approach is based on entirely different principles than the previous approaches.