ヒト血漿中の酸化状態の可能な指標であるアラントインの決定

尿酸はさまざまな活性酸素種によってアラントインに酸化される可能性があるため、尿酸は人体液の抗酸化物質として機能すると仮定されています。したがって、アラントイン濃度の測定は、ヒトの酸化剤生成の定量に役立つ可能性があります。ヒト血漿アラントインレベルの定量化のための信頼できるアッセイを開発します。この方法は、アニオン交換固相抽出を使用して、アリントンからグリオキシル酸への変換および2,4-ジニトロヘニルヒエルハイドラジンで誘導体化する前に、アニオン交換固相抽出を使用して、尿酸およびグリオキシル酸（アッセイに干渉する）からアラントインを迅速かつ選択的に分離することで構成されています。グリオキシレート-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンの測定は、360 nmでの勾配溶出および紫外線検出を伴う逆相高速液クロマトグラフィーを使用することにより達成されます。メソッドの分析パフォーマンスは満足のいくものであり、日々の変動係数が8.9％、バッチ内の変動係数が7.2％です。この方法は、99人の明らかに健康な男性の血漿中のアラントイン濃度の測定に適用され、予備的な参照範囲が報告されています。臨床研究を実施して、in vivoでのフリーラジカル損傷の可能な指標としてアラントインを評価することができます。

Because uric acid may be oxidized to allantoin by various reactive oxygen species, it is postulated that uric acid functions as an antioxidant in human bodily fluids. The measurement of allantoin concentrations may therefore be useful for the quantitation of oxidant generation in humans. We develop a reliable assay for the quantitation of human plasma allantoin levels. The method consists of rapid and selective separation of allantoin from uric and glyoxylic acid (which interfere in the assay) using anion-exchange solid-phase extraction prior to conversion of allantoin to glyoxylic acid and derivatization with 2,4-dinitrohenylhydrazine. Determination of glyoxylate-2,4-dinitrophenylhydrazone is achieved by using reversed-phase high-performance liquid chromatography with gradient elution and ultraviolet detection at 360 nm. The analytical performance of the method is satisfactory, with a day-to-day coefficient of variation of 8.9% and a within-batch coefficient of variation of 7.2%. The method is applied to the measurement of allantoin concentrations in the plasma of 99 apparently healthy men, and a preliminary reference range is reported. Clinical studies can now be performed to evaluate allantoin as a possible indicator of free radical damage in vivo.