VH3ファミリー抗体は、ブドウ球菌タンパク質AのドメインDを結合します

ブドウ球菌タンパク質A（SPA）は、IgGの一定の領域部分であるFCガンマまたは従来のAG結合を媒介するFAB部分のいずれかと相互作用できる45 kDa細菌膜タンパク質です。最近の報告では、SPAはVH3ファミリーに由来するFABと特異的に相互作用することが示されており、VH CDR3、JH、または軽鎖の使用によってほとんど影響を受けません。VH3ファブの結合を担当するSPAの部位を特定するために、ドメインDを表すSPAの61アミノ酸シーケンスを大腸菌でクローン化および発現させ、この小さなタンパク質はVH3ファブとFCガンマ結合特異性の両方を示しました。表面プラズモン共鳴測定により、ドメインDとネイティブSPAが、VH3遺伝子VH26Cの生殖系統構成によってコードされるIgM-Kappaとの最も強力な結合相互作用があることが実証されました。対照的に、FCガンマ結合の明らかな親和性は少なくとも5倍弱かった。ドメインDのバリアントも作成されました。これは、SPAの他のすべてのドメインとドメインDを区別する3コドン挿入を欠いています。この削除はVH3 FABを介したSPA結合活性に大きな影響を与えませんでしたが、FCガンマ結合の親和性が数桁改善されました。これらの観察結果は、T細胞受容体の超抗原のものと非常に類似したB細胞AG受容体との結合相互作用を担当するSPAの部位を特徴づけています。

Staphylococcal protein A (SpA) is a 45-kDa bacterial membrane protein that can interact with either Fc gamma, a constant region portion of IgG, or with the Fab portion that also mediates conventional Ag binding. In recent reports, SpA has been shown to specifically interact with Fab derived from the VH3 family and is little affected by VH CDR3, JH, or light chain usage. To identify a site on SpA responsible for VH3 Fab binding, we cloned and expressed in Escherichia coli the 61 amino acid sequence of SpA that represents domain D, and this small protein exhibited both the VH3 Fab and Fc gamma binding specificities. Surface plasmon resonance measurements demonstrated that domain D and native SpA had the strongest binding interactions with an IgM-kappa encoded by the germline configuration of the VH3 gene VH26c. In contrast, the apparent affinities for Fc gamma binding were at least fivefold weaker. A variant of domain D was also created that is devoid of the three-codon insertion that distinguishes domain D from all other domains in SpA. Although this deletion did not significantly affect the VH3 Fab-mediated SpA binding activity, it did improve the affinity of Fc gamma binding by an order of magnitude. These observations characterize a site on SpA responsible for binding interactions with B cell Ag receptors that are highly analogous to that of superantigens for T cell receptors.