推定されるキノン基質結合部位を欠くNQO1（DT-Diaphorase）メッセンジャーRNAの代替のスプライス型は、ヒト正常および腫瘍組織に存在します

Dt-diaphoraseは、多くのキノンおよびその他の抗がん剤の2電子還元の原因となる遍在的に発現したフラボ酵素です。ヒト組織におけるDt-diaphorase酵素活性の大部分は、NQO1遺伝子の産物です。現在、野生型NQO1 mRNAのレベルに等しい、またはそれを超えるレベルでエクソン4を欠くヒトNQO1 mRNAの代替のスプライシング型を特定しました。エクソン4コードNQO1に由来するDt-diaphoraseの推定キノン基質結合部位と、エクソン4を欠く交代的にスプライシングされたNQO1 mRNAから組換えタンパク質は、キノイドおよびDT-ジアフォラーゼの他の既知の基質との酵素活性を最小限に抑えています。Dt-diaphoraseの生理学的基質は不明であり、代替のスプライシングNQO1 mRNAに由来するタンパク質が適切な基質で酵素活性を持つ可能性があります。フルレングスのdt-diaphoraseタンパク質を発見しましたが、ポリクローナル抗体に対するDt-diaphroraseを使用して、ヒト組織のDt-diaphoraseの適切な小さな型の発現を検出できませんでした。タンパク質製品は急速に劣化しています。NQO1 RNAの代替スプライシングは、NQO1遺伝子発現を調節するための重要なメカニズムを提供できます。

DT-diaphorase is a ubiquitously expressed flavoenzyme responsible for the two-electron reduction of a number of quinone and other anticancer drugs. The majority of DT-diaphorase enzyme activity in human tissues is the product of the NQO1 gene. We have now identified a novel alternatively spliced form of human NQO1 mRNA lacking exon 4 at levels equal to or exceeding those of wild-type NQO1 mRNA. Exon 4 codes for the putative quinone substrate binding site of DT-diaphorase derived from NQO1 and the recombinant protein from alternatively spliced NQO1 mRNA lacking exon 4 has minimal enzyme activity with quinoid and other known substrates of DT-diaphorase. The physiological substrate of DT-diaphorase is unknown, and it is possible that the protein derived from the alternatively spliced NQO1 mRNA could have enzyme activity with an appropriate substrate. We found full-length DT-diaphorase protein but could not detect expression of an appropriately smaller form of DT-diaphorase in human tissues using polyclonal antibody to DT-diaphorase, suggesting that alternatively spliced NQO1 mRNA lacking exon 4 may not be translated or that the protein product is rapidly degraded. Alternative splicing of NQO1 RNA could provide an important mechanism for regulating NQO1 gene expression.