哺乳類細胞における過渡遺伝子発現のためのバクテリオファージT7 RNAポリメラーゼをコードする複製欠損ワクチニアウイルス

ワクシニアウイルス/バクテリオファージT7ハイブリッド過渡発現システムは、T7 RNAポリメラーゼ遺伝子、T7プロモーターによって調節される関心遺伝子を備えたプラスミドベクター、および感染および翻訳に適した細胞株を備えたプラスミドベクターをコードする組換えワクシニアウイルスを採用しています。大多数の細胞で高発現が達成されますが、ワクシニアウイルスの重度の細胞障害効果と感染剤の使用に必要な安全上の注意事項は、システムの望ましくない特徴です。ここでは、T7 RNAポリメラーゼ遺伝子（MVA/T7 Pol）をコードする高度に減衰し、鳥類の宿主制限ワクシニアウイルス組換え剤の構築を報告し、哺乳類細胞での一時的な発現にウイルスを使用することを示しています。MVA/T7 POLは、以前に使用されていた複製能力のあるワクシニアウイルスと比較して細胞パシー効果を低下させ、複数の哺乳類細胞株で高レベルの遺伝子発現を提供します。

The vaccinia virus/bacteriophage T7 hybrid transient expression system employs a recombinant vaccinia virus that encodes the T7 RNA polymerase gene, a plasmid vector with a gene of interest regulated by a T7 promoter, and any cell line suitable for infection and transfection. Although high expression in a majority of cells is achieved, the severe cytopathic effects of vaccinia virus and the safety precautions required for use of infectious agents are undesirable features of the system. Here, we report the construction of a highly attenuated and avian host-restricted vaccinia virus recombinant that encodes the T7 RNA polymerase gene (MVA/T7 pol) and demonstrate the use of the virus for transient expression in mammalian cells. MVA/T7 pol has reduced cytopathic effects compared to the previously used replication-competent vaccinia virus, while providing a high level of gene expression in multiple mammalian cell lines.