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Antimicrobial agents and chemotherapy1994Sep01Vol.38issue(9)

Pseudomonas eruginosa DNA Gyrase Gyras Gyra Gyra Gyra gyra gyra gyra gyra gyra gyra gyra gyra essistide耐性臨床分離株のクローニングおよびヌクレオチド配列

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文献タイプ:
  • Comparative Study
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

Pseudomonas aeruginosa dna gyrase gyra gyra遺伝子をクローン化し、pao1株から配列決定しました。2,769 bpのオープンリーディングフレームが見つかりました。推定分子量103 kDaの923アミノ酸のタンパク質をコード化しました。派生したアミノ酸配列は、Escherichia coli Gyraと67%の同一性を共有し、54%の同一性をSubtilis Gyraと共有しましたが、保存された領域はシーケンス全体、特にN末端に向かって存在していました。PAO1 GYRA遺伝子を伴う温度感受性GYRA遺伝子による大腸菌変異体の補体は、遺伝子が大腸菌で発現し、大腸菌DNAジャイラーゼBサブユニットを機能的に補完できることを示しました。突然変異的に変化したGYRA遺伝子を伴う大腸菌または緑膿菌のPAO1 GYRAの発現により、野生型キノロン感受性が復帰を引き起こし、PAO1 GYRAのキノロンに対する内因性感受性がE. coli Enzymeのそれに匹敵することを示しています。PCRを使用して、嚢胞性線維症患者からのシプロフロキサシン耐性臨床分離株からのいわゆるキノロン抵抗性決定領域を含む緑膿菌ジラの360 bpを増幅しました。突然変異は、テストされた9つの分離株のうち3つで発見されました。これらの変異により、GYRA:ASPのASP(ASP-87)のASP、ASP-87からTYR、THR-83でのASPのシーケンスに次の変化が引き起こされました。他の6つの分離株の耐性メカニズムは不明です。この研究の結果は、GYRAの突然変異変化以外のメカニズムが、嚢胞性線維症患者の肺からの緑膿菌におけるシプロフロキサシン抵抗性の最も一般的なメカニズムであることを示唆しています。

Pseudomonas aeruginosa dna gyrase gyra gyra遺伝子をクローン化し、pao1株から配列決定しました。2,769 bpのオープンリーディングフレームが見つかりました。推定分子量103 kDaの923アミノ酸のタンパク質をコード化しました。派生したアミノ酸配列は、Escherichia coli Gyraと67%の同一性を共有し、54%の同一性をSubtilis Gyraと共有しましたが、保存された領域はシーケンス全体、特にN末端に向かって存在していました。PAO1 GYRA遺伝子を伴う温度感受性GYRA遺伝子による大腸菌変異体の補体は、遺伝子が大腸菌で発現し、大腸菌DNAジャイラーゼBサブユニットを機能的に補完できることを示しました。突然変異的に変化したGYRA遺伝子を伴う大腸菌または緑膿菌のPAO1 GYRAの発現により、野生型キノロン感受性が復帰を引き起こし、PAO1 GYRAのキノロンに対する内因性感受性がE. coli Enzymeのそれに匹敵することを示しています。PCRを使用して、嚢胞性線維症患者からのシプロフロキサシン耐性臨床分離株からのいわゆるキノロン抵抗性決定領域を含む緑膿菌ジラの360 bpを増幅しました。突然変異は、テストされた9つの分離株のうち3つで発見されました。これらの変異により、GYRA:ASPのASP(ASP-87)のASP、ASP-87からTYR、THR-83でのASPのシーケンスに次の変化が引き起こされました。他の6つの分離株の耐性メカニズムは不明です。この研究の結果は、GYRAの突然変異変化以外のメカニズムが、嚢胞性線維症患者の肺からの緑膿菌におけるシプロフロキサシン抵抗性の最も一般的なメカニズムであることを示唆しています。

The Pseudomonas aeruginosa DNA gyrase gyrA gene was cloned and sequenced from strain PAO1. An open reading frame of 2,769 bp was found; it coded for a protein of 923 amino acids with an estimated molecular mass of 103 kDa. The derived amino acid sequence shared 67% identity with Escherichia coli GyrA and 54% identity with Bacillus subtilis GyrA, although conserved regions were present throughout the sequences, particularly toward the N terminus. Complementation of an E. coli mutant with a temperature-sensitive gyrA gene with the PAO1 gyrA gene showed that the gene is expressed in E. coli and is able to functionally complement the E. coli DNA gyrase B subunit. Expression of PAO1 gyrA in E. coli or P. aeruginosa with mutationally altered gyrA genes caused a reversion to wild-type quinolone susceptibility, indicating that the intrinsic susceptibility of the PAO1 GyrA to quinolones is comparable to that of the E. coli enzyme. PCR was used to amplify 360 bp of P. aeruginosa gyrA encompassing the so-called quinolone resistance-determining region from ciprofloxacin-resistant clinical isolates from patients with cystic fibrosis. Mutations were found in three of nine isolates tested; these mutations caused the following alterations in the sequence of GyrA: Asp at position 87 (Asp-87) to Asn, Asp-87 to Tyr, and Thr-83 to Ile. The resistance mechanisms in the other six isolates are unknown. The results of the study suggested that mechanisms other than a mutational alteration in gyrA are the most common mechanism of ciprofloxacin resistance in P. aeruginosa from the lungs of patients with cystic fibrosis.

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