哺乳類組織トリプシン様酵素：代替イソクマリンメカニズムベースの阻害剤、ベンズミジン誘導体、およびアルギニンフルオロアルキルケトン遷移様阻害剤の基質特異性と阻害効力

P1位置にARGまたはLYSを含むアミノ酸およびペプチドチオエステルを、ラット皮膚トリプターゼの基質として、Z-ABA-ARG-SBZL、Z-Gly-Argなどのより良い基質の運動定数KCAT/kmとしてテストしました。-SBZLは5,000,000 M-1 S-1を超えていました。アルギニンフルオロアルキルケトン、ベンザミジン誘導体、および基本官能基を含む代替されたイソクマリンの阻害効力は、ラット皮膚トリプターゼ、ヒト肺トリプターゼ、ヒト皮膚トリプターゼ、およびウシトリプシンで研究されました。1-ナフソイル-ARG-CF3は、0.9ミクロムのKIを含むラット皮膚トリプターゼの最高のアルギニンフルオロアルキルケトン可逆性阻害剤でした。1-（4-アミジーノ - フェニル）-3-（4-フェノキシフェニル）尿素は、それぞれ2および4ミクロムのKI値を持つウシトリプシンおよびラット皮膚トリプターゼに対する競合阻害を示した。3位置でのイソチオウレイドアルコキシ置換基を持つイソクマリン誘導体は、10（4）-10（5）M-1 S-1のKOB/[i]値を持つこれら3つのトリプターゼの強力な不可逆的阻害剤でした。4-クロロ-3-（2-Isothioureido）エトキシ-7-フェニルカルバモイラミノイソーマリンと7-ベンジルカルバモイラミノ-4-クロロ-3-（3-イソチオウレイド）pH 7.5バッファーに立ったときの活動のうち、1日後に0.3 m NH2OHの存在下で活動の30〜75％を取り戻しました。対照的に、ラット皮膚トリプターゼの複合体は迅速に活性を回復し、これらの関連酵素の阻害メカニズムと活性部位構造の違いを示しています。

Amino acid and peptide thioesters which contained Arg or Lys in the P1 position were tested as substrates for rat skin tryptase, and the kinetic constants Kcat/KM for the better substrates such as Z-Aba-Arg-SBzl, and Z-Gly-Arg-SBzl were over 5,000,000 M-1 s-1. The inhibitory potency of arginine fluoroalkyl ketones, benzamidine derivatives, and substituted isocoumarins containing basic functional groups was studied with rat skin tryptase, human lung tryptase, human skin tryptase, and bovine trypsin. 1-Naphthoyl-Arg-CF3 was the best arginine fluoroalkyl ketone reversible inhibitor for rat skin tryptase with a KI of 0.9 microM. 1-(4-Amidino-phenyl)-3-(4-phenoxyphenyl) urea showed competitive inhibition against bovine trypsin and rat skin tryptase with KI values of 2 and 4 microM, respectively. Isocoumarin derivatives with isothioureidoalkoxy substituents at the 3 position were potent irreversible inhibitors of these three tryptases with Kobs/[I] values of 10(4)-10(5) M-1 s-1. 4-Chloro-3-(2-isothioureido)ethoxy-7-phenylcarbamoylaminoisocou marin and 7-benzylcarbamoylamino-4-chloro-3-(3-isothioureido)propox yisocoumarin inactivated trypsin and formed stable trypsin-inhibitor complexes which regained less than 8% of activity upon standing in the pH 7.5 buffer and regained 30-75% of activity in the presence of 0.3 M NH2OH after 1 day. In contrast, the complexes with rat skin tryptase regained activity rapidly, indicating differences in the inhibition mechanism and active site structures of these related enzymes.