移植前マウス胚における酸化剤誘発酸化ストレス中のグルタチオンの状態

実験を実施して、酸化（GSSG）、還元（GSH）、およびタンパク質ミックス化されたジスルフィド（GSSprotein）型に存在するグルタチオンの状態を解明して、発生中および三粒性 - 肥大型水球（TBH）で処理した後、移植前のマウス胚（GSSSTrotein）型を解明して、実施しました。酸化ストレス。グルタチオンは、抽出された胚サンプルを塩化ダンシルで誘導した後、蛍光HPLCによってピコモルレベルで測定されました。GSHの含有量は、未受精卵母細胞のそれから約10倍減少し、0.12 pmol/胚盤胞に減少し、濃度の推定変化を7から0.7 mmに表しています。GSHレベルは、in vivoで発生した胚よりもin vitroで培養された胚の方が低かった。培地にGSHを添加すると、マウス胚のin vitro発達が改善されましたが、驚くべきことに、グルタチオンモノエチルエステルの添加はそうではありませんでした。培地培地に低レベルの酸化剤TBH（13.2 microM）を添加すると、さらなる発達を示す2細胞および胚盤胞期胚の割合が減少しました。13.2ミクロムTBHに15分の曝露後、GSHレベルは2細胞期胚（75％）で著しく減少しましたが、胚盤胞ではわずかに減少しました（25％）。GSHの喪失は、GSSGとGSSSPROTENの増加によって説明され、胚が酸化ストレスを受けていることを示しています。これらのデータは、移植前胚が酸化ストレスを引き起こす可能性のある条件に非常に敏感であり、発達中にグルタチオンの状態が劇的に変化することを示すことを示しています。

Experiments were conducted to elucidate the status of glutathione present in the oxidized (GSSG), reduced (GSH), and protein-mixed disulfide (GSSprotein) forms in preimplantation mouse embryos during development and after treatment with tertiary-butyl hydroperoxide (tBH) to cause oxidative stress. Glutathione was measured at picomolar levels by fluorimetric HPLC after derivatization of extracted embryonic samples with dansyl chloride. GSH content decreased approximately 10-fold from that in the unfertilized oocyte to 0.12 pmol/blastocyst, representing an estimated change in concentration from 7 to 0.7 mM. GSH levels were lower in embryos cultured in vitro than in embryos that developed in vivo. Addition of GSH to the culture medium improved in vitro development of mouse embryos, but surprisingly the addition of glutathione monoethyl ester did not. Addition of low levels of the oxidant tBH (13.2 microM) to culture medium decreased the percentage of two-cell and blastocyst stage embryos that exhibited further development. After 15-min exposure to 13.2 microM tBH, GSH levels were markedly decreased in the two-cell stage embryo (75%), but only slightly decreased (25%) in the blastocyst. The loss of GSH was accounted for by increases in GSSG and GSSprotein, indicating that the embryo was undergoing oxidative stress. These data indicate that preimplantation embryos are very sensitive to conditions that can cause oxidative stress and show also that their glutathione status changes dramatically during development.