ヒト免疫不全ウイルス1型のトランス活性化応答領域によってコードされるRNA要素は、転写の開始の下流に変位したときに機能的です

ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）トランスアクチベータータンパク、TATは、ウイルス長末端繰り返しからの転写を特異的に刺激します。TATは、トランス活性化応答領域（TAR）によってコードされるRNAステムループ構造に結合します。転写の開始の下流に変位したときにTARが機能的かどうかをテストするために、セルのない転写システムで複製されたTAR要素を運ぶ一連のテンプレートをアッセイしました。通常配置されたTARエレメント（TAR-1）が、細胞因子の結合部位として機能するTAT結合部位または頂端ループシーケンスのいずれかの変異によって不活性化される場合、トランス活性化は野生型TAR要素によって救助される可能性があります。ダウンストリーム（TAR-2）。TAR-2要素は、TAR-1の下流に200 ntを> 200 ntに配置しても機能的です。TAR補完実験では、機能的なTAR要素には無傷のTAT結合部位と無傷の頂端ループシーケンスの両方が必要であることも示されています。たとえば、TAR-1がループ要素に変異を運ぶ場合、TAT結合部位に変異を運ぶTAR-2要素によって救助することはできません。TAR-1の置換変異は、TARの5 '半分が効率的な転写開始に必要な必須DNA要素もコードすることを示しています。これらの結果は、TAR RNAを結合するTATおよび細胞補因子がTARを介した輸送中に転写複合体と関連することを強く示唆しています。

The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) trans-activator protein, Tat, specifically stimulates transcription from the viral long terminal repeat. Tat binds to an RNA stem-loop structure encoded by the trans-activation response region (TAR). To test whether TAR is functional when displaced downstream of the start of transcription, we assayed a series of templates carrying duplicated TAR elements in cell-free transcription systems. When the normally positioned TAR element (TAR-1) is inactivated by mutations in either the Tat binding site or the apical loop sequence, which acts as the binding site for a cellular factor, transactivation can be rescued by a wild-type TAR element placed downstream (TAR-2). The TAR-2 element is functional even when placed > 200 nt downstream of TAR-1. TAR complementation experiments have also shown that a functional TAR element requires both an intact Tat binding site and an intact apical loop sequence. For example, if TAR-1 carries a mutation in the loop element it cannot be rescued by a TAR-2 element carrying a mutation in the Tat binding site. Substitution mutations in TAR-1 show that the 5' half of TAR also encodes an essential DNA element which is required for efficient transcription initiation. These results strongly suggest that Tat and cellular cofactors which bind TAR RNA associate with the transcription complex during its transit through TAR.