ヒト輸送体を介したドーパミンの放出

ヒトドーパミン輸送体cDNAをクローン化し、cos-7細胞にトランスフェクトしました。これは、小胞貯蔵および放出メカニズムを欠く細胞株です。ドーパミン輸送体を発現する細胞は、トランスポーターを介してドーパミンを取り上げて放出する能力を獲得しました。K+の脱分極濃度または細胞外Na+の低濃度などのin vivoでの内側輸送を刺激するイオン条件は、翻訳COS-7細胞からの[3H]ドーパミンのCa（2+）ドーパミンの独立した放出を刺激することがわかりました。ドーパミン取り込み阻害剤は、輸送体を介した流出に3つの効果の1つを持っていました。一部の薬物は、取り込みを阻害することに加えて、ドーパミンの自然放出を阻害しました。このクラスの薬には、マジンドル、GBR-12935、ブプロピオン、ノミフェンシン、およびベンズトロピンが含まれていました。人間による乱用の可能性を秘めたすべての薬物は、放出（メタンフェタミン、アンフェタミン、およびエタノール）を強化するか、放出に影響を与えなかった（フェンシクリジン、コカイン、および勝利35,428）。ヒト輸送体を介したドーパミン流出への影響に基づいて、取り込みブロッカーのクラスを定義する能力は、乱用されていない薬物と区別するトランスポーターの構造的特徴の特定につながる可能性があります。

A human dopamine transporter cDNA was cloned and transfected into COS-7 cells, a cell line that lacks vesicular storage and release mechanisms. Cells expressing the dopamine transporter acquired the capacity to take up and release dopamine via the transporter. Ionic conditions that stimulate inside-out transport in vivo, such as depolarizing concentrations of K+ or low concentrations of extracellular Na+, were found to stimulate Ca(2+)-independent release of [3H]dopamine from transfected COS-7 cells. Dopamine uptake inhibitors had one of three effects on transporter-mediated efflux. Some drugs, in addition to inhibiting uptake, inhibited spontaneous release of dopamine. Drugs in this class included mazindol, GBR-12935, bupropion, nomifensine, and benztropine. All of the drugs with the potential for abuse by humans either enhanced release (methamphetamine, amphetamine, and ethanol) or had no effect on release (phencyclidine, cocaine, and WIN 35,428). The ability to define classes of uptake blockers based on their effects on human transporter-mediated dopamine efflux may lead to the identification of structural features of the transporter that differentiate abused from nonabused drugs.