ヘーゼル花粉の主要なアレルゲンであるCor A Iの4つの組換えアイソフォームは、異なるIgE結合特性を示しています

以前の研究では、注文ファガールの木からの花粉（例：バーチ、アルダー、ヘーゼル、ホーンビームなど）にはすべて、1つの主要なアレルゲンが含まれています。これらのタンパク質はこれらの樹種の間で交差反応性があり、樹木と浸透性の患者の約95％がこれらのアレルゲンに結合するIgEを示しています。報告されたヘーゼル花粉アレルゲンCor A Iの報告されたN末端アミノ酸配列を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応を使用してCor-A-I cDNAを増幅することができました。cDNAインサートを備えた4つのクローンが分離されました。4つのクローンすべてには、477ヌクレオチド（159アミノ酸）のオープンリーディングフレームが含まれていましたが、3'-ノンコード領域の長さは異なりました。重複する領域内では、4つのクローンの3 '非コード領域のヌクレオチド配列がほぼ同じでした。オープンリーディングフレームは、主要なヘーゼル花粉アレルゲン、Cor A Iのさまざまなアイソフォームをコード化しました。クローンは、それぞれCor A/5、6、11、16に指定されました。これらのcor a iアイソフォームの推定されたアミノ酸配列の比較により、96-99％のアイデンティティが明らかになりました。Cor A I IsoformsとBet V Iの間のシーケンスのアイデンティティは、71〜73％（80.5-83％の類似性）でした。Cor A Iアイソフォームのアミノ酸配列を、Aln g Iの公開された配列、アルダーの主要なアレルゲン、およびCar B IおよびIsoforms、Hornbeamの主要なアレルゲン、75.5-76.7％アイデンティティ（83.6-85％の類似性）、およびそれぞれ83.6-89.9％シーケンスID（類似性89.3-95％）がそれぞれ見つかりました。4つのCor A I cDNAをプラスミドPKK223-3にサブクローニングし、大腸菌で非融合タンパク質として発現しました。樹木と腫瘍のアレルギー患者から血清IgEを結合する能力が調査されました。4つのクローン化されたアイソフォームは、SDS/ページで17 kDaの見かけの分子量を示しました。これは、樹木pollenアレルギー性患者からの天然の花粉由来のIgE抗体と同一であり、4つの組換えアイソフォームすべてと反応しました。ただし、異なるアイソフォームのIgE結合パターンの顕著な違いに注目しました。さらに、Cor A I/11は、抗（BET V I）MAB、BIP 1によって認識された唯一のアイソフォームでした。我々の結果は、COR A Iアイソフォームが異なる抗原性およびアレルギー性特性を示すことを示しています。それらのアミノ酸配列。これらの発見は、I型アレルギーの診断と免疫療法のための試薬の開発に影響を与えます。

Previous studies showed that pollens from trees of the order Fagales (e.g. birch, alder, hazel and hornbeam) all contain one major allergen. These proteins are cross-reactive between these tree species, and approximately 95% of tree-pollen-allergic patients display IgE binding to these allergens. Using the reported N-terminal amino acid sequence of the hazel pollen allergen Cor a I, it was possible to amplify Cor-a-I cDNA by use of the polymerase chain reaction. Four clones with cDNA inserts were isolated. All four clones contained an open reading frame of 477 nucleotides (159 amino acids) but differed in length of their 3'-non-coding regions. Within the overlapping regions, the nucleotide sequence of the 3'-non-coding regions of the four clones were nearly identical. The open reading frames coded for different isoforms of the major hazel pollen allergen, Cor a I. The clones were designated Cor a I/5, 6, 11 and 16, respectively. Comparison of the deduced amino acid sequences of these Cor a I isoforms revealed identities of 96-99%. The sequence identities between the Cor a I isoforms and Bet v I, the major birch pollen allergen, were 71-73% (80.5-83% similarity). Comparing amino acid sequences of Cor a I isoforms with the published sequences of Aln g I, the major allergen from alder, and Car b I and isoforms, the major allergen from hornbeam, 75.5-76.7% identity (83.6-85% similarity) and 83.6-89.9% sequence identity (89.3-95% similarity), respectively, was found. The four Cor a I cDNAs were subcloned into plasmid pKK223-3 and expressed in Escherichia coli as non-fusion proteins; their capacity to bind serum IgE from tree-pollen-allergic patients was investigated. The four cloned isoforms showed an apparent molecular mass of 17 kDa in SDS/PAGE, identical to the natural, pollen-derived Cor a I. IgE antibodies from tree-pollen-allergic patients reacted with all four recombinant isoforms. However, we noted marked differences in the IgE-binding patterns of the distinct isoforms. Furthermore, Cor a I/11 was the only isoform recognized by the anti-(Bet v I) mAb, BIP 1. Our results demonstrate that Cor a I isoforms display different antigenic and allergenic properties, very likely due to few but significant changes in their amino acid sequences. These findings have implications for the development of reagents for diagnosis and immunotherapy of type I allergies.