ヒト染色体の長距離アルファサテライトDNAアレイ上のクレストセントロメア抗原部位に反映されたCENP-Bボックスの分布21

ヒト染色体21のアルフォイドDNAアレイの長距離組織は、マウスヒト体細胞ハイブリッドを使用して調査されました。2つの異なる長いアルファイドDNAアレイ、遺伝子座アルファ21-Iおよびアルファ21-IIは、ヒト染色体21のセントロメア領域で同定されました。11モノマーリピートユニット（11メール）のアレイで構成されるアルファ21-I遺伝子座は、合計1.3 mbpの長さであると推定されました。Centromere Protein B（CENP-B）の結合部位であるCENP-Bボックスは、CENP-Bボックスなしで2つのモノマーユニットが繰り返された1つの場所を除き、11 Merの他のすべてのモノマーユニットに登場しました。他の遺伝子座であるアルファ21-IIは、アルファ21-I遺伝子座の成分との相同性が低いalphoidサブファミリーで構成されていることがわかりました。合計32のモノマーユニットを提示する5つの異なるアルフォイドクローンが、アルファ21-II遺伝子座から分離されました。これらのモノマーユニットのシーケンスは、71〜89％の間で分岐し、CENP-Bボックスを含むユニットは見つかりませんでした。2色の魚を使用した分析により、アルファ21-Iは主要な収縮に局在していましたが、アルファ21-IIサイトはわずかに短い腕側に配置されていました。さらに、魚と免疫蛍光染色の組み合わせは、アルファ21-I部位が共局在化し、有糸分裂染色体および間期核の頂上のセントロメア抗原性部位と重複していることを示しましたが、アルファ21-IIは広く分布していました。我々のデータは、高周波で定期的に間隔を置いたCENP-Bボックスを含む遺伝子座アルファ21-Iと、セントロメア抗原のアセンブリ部位が、ヒト細胞とマウス細胞の両方で共通のセントロメア機能に関与している可能性があることを示唆しています。

The long-range organization of alphoid DNA arrays of human chromosome 21 was investigated using a mouse-human somatic cell hybrid. Two distinct long alphoid DNA arrays, the loci alpha 21-I and alpha 21-II, were identified in the centromere region of human chromosome 21. The alpha 21-I locus, composed of an array of 11 monomer repeat units (the 11 mer), was estimated to have a total length of 1.3 Mbp. CENP-B boxes, the binding sites of the centromere protein B (CENP-B), appeared in every other monomer unit in the 11 mer except for one place where two monomer units were repeated without any CENP-B box. The other locus, alpha 21-II, was found to be composed of alphoid subfamilies with low homology to the components of alpha 21-I locus. Five different alphoid clones presenting 32 monomer units in total were isolated from the alpha 21-II locus. Sequences of these monomer units diverged between 71-89% and no unit containing a CENP-B box was found. By analysis using two color FISH, the alpha 21-I was localized to the primary constriction, whereas the alpha 21-II site was located slightly to the short arm side. Furthermore, a combination of FISH and immunofluorescent staining indicated that the alpha 21-I site was co-localized and overlapped with the CREST centromere antigenic site on mitotic chromosomes and in interphase nuclei, while alpha 21-II was distributed broadly. Our data suggest that the locus alpha 21-I containing regularly spaced CENP-B boxes at high-frequency and the assembly site of the centromere antigens may be involved in common centromere function in both human and mouse cells.