活性化されたラシャ遺伝子によって誘導されるマウスケラチノサイト分化の変化は、プロテインキナーゼC-αによって媒介されます

V-Rasha癌遺伝子（V-Rasha keratinocytes）を発現する原発性マウス角化細胞は、ヌードマウスに移植され、in vivoとin vitroの両方の末端分化のシグナルに異常に反応すると扁平上皮乳頭腫を生成します。プロテインキナーゼC（PKC）活性化因子とV-Rashaは、培養ケラチノサイトに同様の表現型の変化を誘発し、細胞ジアシルグリセロールレベルはRAS変換型ケラチノサイトで構成的に上昇しているため、PKCがこの細胞タイプにおける腫瘍性RASの下流標的であるかどうかをテストしました。Ca（2+） - 対照細胞と比較した場合、培養V-Rashaケラチノサイトの溶解物では、依存性PKC活性が増加しました。対照的に、CA（2+） - 独立した活動は減少しました。PKC活性化因子と同様に、V-RashaはCa（2+）をブロックしました - K8の異常な発現を誘導しながら、初期表皮分化マーカーの媒介発現ケラチンK1およびK10。V-Rasha KeratinocytesをブリオスタチンとPKC機能をブロックする前処理は、Ca（2+）を媒介したK1およびK10の発現を媒介し、K8の異常な発現をブロックし、これらの応答がPKC経路によって媒介されることを示唆しています。さらに、K1の発現は、培養ケラチノサイトで検出された唯一のCa（2+）依存性PKCアイソザイムであるPKC-alphaを特異的にダウン化するブリオスタチン用量で回復します。K1およびK10の阻害とは対照的に、Ca（2+） - PKC活性化因子で処理した正常なケラチノサイトで以前に報告されたように、Loricrin、Filaggrin、およびケラチノサイトトランスグルタミナーゼの誘発性表皮分化マーカー、フィラグリン、およびケラチノサイトトランスグルタミナーゼの発現が加速されました。ブリオスタチンによるV-Rashaケラチノサイトの前処理は、これらの細胞の後期マーカーの発現をブロックし、この反応はPKC-αのダウンレギュレーションと相関していた。この研究の結果は、発癌性RASがPKCシグナル伝達経路の機能を変化させることによりケラチノサイトの分化を変化させ、PKC-alphaはケラチンK1およびK10の低下抑制に関与し、ロリクリンの発現のアップレギュレートの発現に関与する特定のアイソザイムであることを示唆しています。フィラグリン、およびケラチノサイトトランスグルタミナーゼ。

Primary mouse keratinocytes expressing the v-rasHa oncogene (v-rasHa keratinocytes) produce squamous papillomas when grafted onto nude mice and respond abnormally to signals for terminal differentiation both in vivo and in vitro. Since protein kinase C (PKC) activators and v-rasHa induce similar phenotypic changes in cultured keratinocytes, and cellular diacylglycerol levels are constitutively elevated in ras-transformed keratinocytes, we tested whether PKC is a downstream target for oncogenic ras in this cell type. Ca(2+)-dependent PKC activity was increased in lysates from cultured v-rasHa keratinocytes when compared to control cells; in contrast, Ca(2+)-independent activity decreased. Similar to PKC activators, v-rasHa blocked Ca(2+)-mediated expression of the early epidermal differentiation markers keratins K1 and K10 while inducing aberrant expression of K8. Pretreatment of v-rasHa keratinocytes with bryostatin to block PKC function restored Ca(2+)-mediated expression of K1 and K10 and blocked abnormal expression of K8, suggesting that these responses are mediated by the PKC pathway. Furthermore, expression of K1 is restored at bryostatin doses which specifically down-modulate PKC-alpha, the only Ca(2+)-dependent PKC isozyme detected in cultured keratinocytes. In contrast to the inhibition of K1 and K10, Ca(2+)-induced expression of the late epidermal differentiation markers loricrin, filaggrin, and keratinocyte transglutaminase was accelerated by v-rasHa, as previously reported in normal keratinocytes treated with PKC activators. Pretreatment of v-rasHa keratinocytes with bryostatin blocked expression of late markers in these cells, and this response was correlated with down-regulation of PKC-alpha. The results of this study suggest that oncogenic ras alters keratinocyte differentiation by altering the function of the PKC signaling pathway, and that PKC-alpha is the specific isozyme involved in down-modulating expression of keratins K1 and K10 and up-regulating expression of loricrin, filaggrin, and keratinocyte transglutaminase.