エンテロコッカスfaecalisの低親和性ペニシリン結合タンパク質の大腸菌におけるクローニング、シーケンス、および発現

低親和性ペニシリン結合タンパク質は、ベータラクタム抗生物質耐性に関与するいくつかのグラム陽性菌における特定の膜タンパク質です。Enterococcus faecalisの低親和性ペニシリン結合タンパク質5（PBP5）の構造遺伝子をクローン化して配列決定しました。3378 bpのシーケンスから、2040 bpのコーディング領域が特定されました。生化学分析から、E。faecalispbp5は溶けたN末端を持つII型膜タンパク質であり、分子量の679アミノ酸で構成されていることが明らかになりました。黄色ブドウ球菌PBP2A、両方ともベータラクタム耐性に関与する低親和性PBP。腸球菌の他の種に存在する膜タンパク質と交差反応した抗PBP5抗体は、遺伝子フラグメント全体がE. faecalis株のDNAとのみハイブリダイズしたため、腸球菌の低親和性PBPをコードする遺伝子が硬直しないことを示唆しています。。この実験では、ジゴキシゲニン標識E. faecalis DNAが使用されました。

Low-affinity penicillin binding proteins are particular membrane proteins, in several Gram-positive bacteria, which are involved in beta-lactam antibiotic resistance. The structural gene for the low-affinity penicillin binding protein 5 (PBP5) of Enterococcus faecalis was cloned and sequenced. From the sequence of the 3378 bp, a 2040 bp coding region was identified. From biochemical analysis it emerges that E. faecalis PBP5 is a type II membrane protein with an uncleaved N-terminal and is composed of 679 amino acids with a molecular weight of 74055. This protein showed 48 and 33% of identity with Enterococcus hirae PBP5 and Staphylococcus aureus PBP2a, both low-affinity PBPs involved in beta-lactam resistance. Anti-PBP5 antibodies cross-reacted with a membrane protein present in other species of enterococci, but the entire gene fragment cloned hybridized only with DNAs of E. faecalis strains, thus suggesting that genes coding for low-affinity PBPs of enterococci are not strictly homologous. In this experiment digoxigenin-labelled E. faecalis DNA was used.