培養中の鶏軟骨細胞に対するアフラトキシンB1の効果

DNAおよびプロテオグリカン合成に対するアフラトキシンB1のin vitro効果は、チキン軟骨細胞培養によるトリチン化チミジンとラジオ硫酸塩の取り込みを測定することにより評価されました。軟骨細胞は、35日齢の鶏肉の成長板軟骨から採取され、3回培養され、0、1、5、10、または25マイクログラムのアフラトキシンB1/mLの培地で処理されました。次に、培養物を[3H]チミジンまたは[35S]硫酸で別々にスパイクしました。細胞、マトリックス、および培地を採取した後、放射能をシンチレーションカウンターで測定しました。アフラトキシンB1は、チキン軟骨細胞によるトリチンチミジンの取り込みによって測定されるように、DNA合成の用量依存性阻害をもたらしました：54.6％、30.9％、25.9％、および5.9％は、1、5、10、および25マイクログラムAflatoxin B1/MLで処理された培養での対照の5.9％。軟骨細胞培養にラジオ硫酸塩の取り込みによって測定された硫酸化プロテオグリカン合成は、すべてのアフラトキシンB1レベルによって培地および細胞間マトリックスで減少しました。対照と比較して、21％少ない（p <0.05）ラジオ硫酸塩は、1マイクログラムのアフラトキシンB1/mLに曝露した軟骨細胞からの培地画分の非マトリックス高分子に組み込まれました。ただし、細胞間マトリックスのプロテオグリカンにラジオ硫酸塩の取り込みを大幅に減少させるために、5マイクログラムのアフラトキシンB1/mLが必要でした（コントロールよりも34％少ない）。ラジオ硫酸塩の組み込みの平均が、トリチオンチミジンの取り込みの平均に対する細胞間高分子への比率の比は、アフラトキシンB1がプロテオグリカン合成よりも多くのDNA合成を阻害することを示しました。

In vitro effects of aflatoxin B1 on DNA and proteoglycan synthesis were assessed by measuring tritiated thymidine and radiosulfate incorporation by chicken chondrocyte cultures. Chondrocytes were harvested from the growth-plate cartilage of a 35-day-old chicken, cultured in triplicate, and treated with 0, 1, 5, 10, or 25 micrograms aflatoxin B1/ml of culture medium. The cultures were then spiked separately with [3H]thymidine or [35S]sulfate. After the cells, matrix, and medium were harvested, radioactivity was measured by a scintillation counter. Aflatoxin B1 resulted in a dose-dependent inhibition of DNA synthesis, as measured by tritiated thymidine incorporation by chicken chondrocytes: 54.6%, 30.9%, 25.9%, and 5.9% of control in cultures treated with 1, 5, 10, and 25 micrograms aflatoxin B1/ml of culture medium, respectively (P < 0.05). Sulfated proteoglycan synthesis, as measured by radiosulfate incorporation in chondrocyte cultures, was decreased in the media and intercellular matrix by all aflatoxin B1 levels. Compared with controls, 21% less (P < 0.05) radiosulfate was incorporated into non-matrix macromolecules of the medium fraction from chondrocytes exposed to 1 microgram aflatoxin B1/ml. However, 5 micrograms aflatoxin B1/ml was necessary to produce a significant decrease in radiosulfate incorporation in proteoglycans of intercellular matrix (34% less than controls). The ratios of the means of radiosulfate incorporation into intercellular macromolecules to the means of tritiated thymidine incorporation indicated that aflatoxin B1 inhibited DNA synthesis more than proteoglycan synthesis.