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The Biochemical journal1994Jun01Vol.300 ( Pt 2)issue(Pt 2)

アルカリゲンにおける2-アミノベンゼンスルホン酸の酸素化と自発的な脱アミノ化は、2-ヒドロキシムキシン酸に対するその後のメタ環切断および自発的な脱硫酸化を伴うO-1株O-1を伴う

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

2-アミノベンゼンスルホン酸(2AS)は、アルカリゲンsp。によって分解されます。以前に検出されたが正体不明の中間体を介してO-1を歪みます。株O-1の変異体は、この中間体を排泄することがわかった。3-スルホカテコール(3SC)。株O-1の細胞抽出物からのタンパク質は、アニオン交換クロマトグラフィーによって分離されました。多成分オキシゲナーゼが観察され、NADH、O2、および2Aのそれぞれがそれぞれ3SC、NH3、NAD+のそれぞれ1モルに変換されました。酵素は、おそらく2-アミノ-2,3-ジオール部分の環の触媒形成とアミノ基での除去をもたらしたと思われます。3SCは、3-クロロカテコールを含む3-スルホカテコール-2,3-ジオキシゲナーゼ(3SC23O)の不活性化によって防止できるメタリング切断を介してさらに分解されました。TRISバッファーでは、分離された3SC23Oは、一時的な黄色の中間体を含む3SCおよびO2のそれぞれのそれぞれの反応を触媒し、1 molの硫黄と2つの有機生成物を放出しました。主要製品はN.M.R.によって特定されました。およびG.C./M.S.5-カルボキシペンタ-2,4-dien-5-オリド(CPDO)として、2-ヒドロキシマコン酸(2HM)の形成の指標。2番目の製品は、本物の素材と比較して、Z、E異性体の2HMとして識別されました。製品混合物のCPDOを化学的に(Z、E)-2HMに加水分解した場合、1 molの(Z、E)-2HM/molの3SCが観察されました。3SC x 3SC23Oの酸素化がリン酸緩衝液で実行された場合、2 hmのケト形式である1つの産物のみが検出されました。このジオエートは、リン酸緩衝液中の本物(Z、E)-2HMからも形成されました。天然産物(z、e)-2hmの生体産物からの形成、3scは、不安定な2-ヒドロキシ-6-スルホルホンコン酸セミアルデヒドへの酸素化を伴い、自発的に2時間になります。この経路では、酵素反応ごとに少なくとも1つの自発反応があるように見えます。

2-アミノベンゼンスルホン酸(2AS)は、アルカリゲンsp。によって分解されます。以前に検出されたが正体不明の中間体を介してO-1を歪みます。株O-1の変異体は、この中間体を排泄することがわかった。3-スルホカテコール(3SC)。株O-1の細胞抽出物からのタンパク質は、アニオン交換クロマトグラフィーによって分離されました。多成分オキシゲナーゼが観察され、NADH、O2、および2Aのそれぞれがそれぞれ3SC、NH3、NAD+のそれぞれ1モルに変換されました。酵素は、おそらく2-アミノ-2,3-ジオール部分の環の触媒形成とアミノ基での除去をもたらしたと思われます。3SCは、3-クロロカテコールを含む3-スルホカテコール-2,3-ジオキシゲナーゼ(3SC23O)の不活性化によって防止できるメタリング切断を介してさらに分解されました。TRISバッファーでは、分離された3SC23Oは、一時的な黄色の中間体を含む3SCおよびO2のそれぞれのそれぞれの反応を触媒し、1 molの硫黄と2つの有機生成物を放出しました。主要製品はN.M.R.によって特定されました。およびG.C./M.S.5-カルボキシペンタ-2,4-dien-5-オリド(CPDO)として、2-ヒドロキシマコン酸(2HM)の形成の指標。2番目の製品は、本物の素材と比較して、Z、E異性体の2HMとして識別されました。製品混合物のCPDOを化学的に(Z、E)-2HMに加水分解した場合、1 molの(Z、E)-2HM/molの3SCが観察されました。3SC x 3SC23Oの酸素化がリン酸緩衝液で実行された場合、2 hmのケト形式である1つの産物のみが検出されました。このジオエートは、リン酸緩衝液中の本物(Z、E)-2HMからも形成されました。天然産物(z、e)-2hmの生体産物からの形成、3scは、不安定な2-ヒドロキシ-6-スルホルホンコン酸セミアルデヒドへの酸素化を伴い、自発的に2時間になります。この経路では、酵素反応ごとに少なくとも1つの自発反応があるように見えます。

2-Aminobenzenesulphonic acid (2AS) is degraded by Alcaligenes sp. strain O-1 via a previously detected but unidentified intermediate. A mutant of strain O-1 was found to excrete this intermediate, which was isolated and identified by m.s., 1H- and 13C-n.m.r. as 3-sulphocatechol (3SC). Proteins from cell extracts of strain O-1 were separated by anion-exchange chromatography. A multicomponent oxygenase was observed to convert 1 mol each of NADH, O2 and 2AS into 1 mol each of 3SC, NH3 and NAD+. The enzyme presumably catalysed formation of the ring of a 2-amino-2,3-diol moiety, and elimination in the amino group led to a rearomatization. 3SC was further degraded via meta ring cleavage, which could be prevented by inactivation of the 3-sulphocatechol-2,3-dioxygenase (3SC23O) with 3-chlorocatechol. In Tris buffer, the separated 3SC23O catalysed the reaction of 1 mol each of 3SC and O2 involving a transient yellow intermediate, and release of 1 mol of sulphite and two organic products. The major product was identified by n.m.r. and by g.c./m.s. as 5-carboxypenta-2,4-dien-5-olide (CPDO), an indicator of formation of 2-hydroxymuconic acid (2HM). The second product was identified as the Z,E isomer of 2HM by comparison with authentic material. When the CPDO in the product mixture was chemically hydrolysed to (Z,E)-2HM, 1 mol of (Z,E)-2HM/mol of 3SC was observed. If oxygenation of 3SC by 3SC23O was carried out in phosphate buffer, only a single product was detected, a keto form of 2HM. This dioate was also formed from authentic (Z,E)-2HM in phosphate buffer. Formation of the natural product (Z,E)-2HM from the xenobiotic, 3SC, seems to involve oxygenation to the unstable 2-hydroxy-6-sulphonomuconic acid semialdehyde, which hydrolyses spontaneously to 2HM. There would appear to be at least one spontaneous reaction per enzyme reaction in this pathway.

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