ゲノムの安定性に対するGAG領域の効果：rous肉腫ウイルスのブライアン株からの配列を含む鳥のレトロウイルスベクター

以前に、鳥細胞の遺伝子を供給および発現するために使用できるレトロウイルスベクターをベースにしたレトロウイルスベクターに基づいた複製能力のSchmidt ruppin-a rous sarcoma Virus（RSV）ベースのレトロウイルスベクターについて説明しました。プロトタイプベクターを変更して、より汎用性が高く効率的なシステムを開発しました。これらのレトロウイルスベクターのSR-A RSV POL領域のブライアンハイチターRSV（BH-RSV）からのポリメラーゼ（POL）領域の置換により、これらのウイルスがより効率的に複製されます。GAG領域を2つの独立したBH-RSV変換細胞株からクローニングし、これらのGAG領域のいずれかを置換するとベクターの複製および/または遺伝子発現が改善されるかどうかをテストしました。キメラベクターが構築され、プロトタイプベクター（SR-A RSV）のGAG領域が、元のSR-A RSV POLまたはBH-RSV POL領域のいずれかを備えたベクターのBH-RSV GAGの対応するセグメントに置き換えられました。すべてのベクトルには、細菌クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子（CAT）が含まれていました。結果は、異なるSR-A RSVおよびBH-RSV GAG-POLキメラがウイルスおよびCAT遺伝子発現のレベルに大きな影響を与える可能性があることを示しています。BH-RSV GAG領域の1つの挿入は、他の領域ではなく、不安定なゲノムでウイルスを生じさせました。

We have previously described replication-competent Schmidt Ruppin-A Rous sarcoma virus (RSV)-based retroviral vectors that can be used to deliver and express genes in avian cells. We have continued to modify the prototype vectors to develop a more versatile and efficient system. Substitution of the polymerase (pol) region from the Bryan high-titer RSV (BH-RSV) for the SR-A RSV pol region of these retroviral vectors causes these viruses to replicate more efficiently. We cloned the gag regions from two independent BH-RSV-transformed cell lines and tested whether substituting either of these gag regions would improve the replication and/or gene expression of the vectors. Chimeric vectors were constructed in which the gag region of the prototype vector (SR-A RSV) was replaced with the corresponding segment of BH-RSV gag in vectors that had either the original SR-A RSV pol or the BH-RSV pol region. All vectors contained the bacterial chloramphenicol acetyltransferase gene (CAT). The results indicate that different SR-A RSV and BH-RSV gag-pol chimeras can significantly affect the level of viral and CAT gene expression. The insertion of one of the BH-RSV gag regions, but not the other, gave rise to viruses with unstable genomes.