Dns-Gly-(p-NO2)Phe-beta Ala、中性エンドペプチダーゼ 2411 の特異的な蛍光基質

新規の蛍光ペプチド、ダンシル-Gly-（p-No2）phe-beta ala（dgnpa）は、エンケファリンおよび房性ナトリック性ペプチド分解に関与するニュートラルエンドペプチダーゼ24.11の選択的基質として合成され、異常のマーカーとして合成されました。）リンパ肝細胞の表面。基質の切断Gly-（p-no2）pheアミド結合は、ニトロフェニル残基によるダンシル蛍光の分子内消失の消失に関連する蛍光の増加につながります。この新しい蛍光基質は、後者のGly4残基がベータアラニンに置き換えられているため、市販のダンシルD-Ala-Gly-（p-no2）phe-glyよりも改善されているため、残留感度の残留感度が排除されているためアンジオテンシン変換酵素へのペプチド。さらに、D-ALA2残基の削除は、消光効率を高めることが示され、アッセイの感度が高まり、ジオキサンとの反応を止めることでさらに改善されました。現在の基質は、親和性（km = 37 microM、v = 0.72 mumol min-1 mgタンパク質-1）、選択性、およびその前駆体に対する感度を改善し、96ウェルマイクロプレートと蛍光プレートリーダーを使用した自動アッセイで使用されました。

A novel fluorogenic peptide, dansyl-Gly-(p-NO2) Phe-beta Ala (DGNPA), was synthesized as a selective substrate for neutral endopeptidase 24.11, an enzyme involved in enkephalin and atrial natriuretic peptide degradation and a marker of differentiation (CD10) on the surface of lymphohematopoietic cells. Cleavage of the substrate Gly-(p-NO2)Phe amide bond leads to an increase in fluorescence related to the disappearance of the intramolecular quenching of the dansyl fluorescence by the nitrophenyl residue. This new fluorogenic substrate is an improvement over the commercially available dansyl-D-Ala-Gly-(p-NO2)Phe-Gly, as the Gly4 residue of the latter has been replaced by a beta-alanine, therefore eliminating a residual sensitivity of the peptide toward angiotensin converting enzyme. Moreover, deletion of the D-Ala2 residue was shown to increase the quenching efficiency, thus raising the sensitivity of the assay, which was further improved by stopping the reaction with dioxane. The present substrate has improved affinity (Km = 37 microM, V = 0.72 mumol min-1 mg protein-1), selectivity, and sensitivity over its precursor and was used in automated assays using 96-well microplates and a fluorescence plate reader.