SV40 T抗原の不死化ヒト前立腺上皮細胞の腫瘍形成性：上皮成長因子受容体（EGFR）発現の減少との関連

私たちの主な目的は、次のことでした。1）前立腺腫瘍の進化の研究のシステムを開発する。2）前立腺腫瘍の進行における表皮成長因子/表皮成長因子受容体（EGF/EGFR）経路の役割を調べます。以前は、SV40 T抗原遺伝子（P69SV40T）とのトランスフェクションにより不死化された成体ヒト前立腺上皮細胞は、6か月の遅延期間の2/18マウスのみで腫瘍を産生しました。ヌードマウスの1サイクルまたは2サイクルの成長後、これらの腫瘍から回収された細胞の再注射により、2/4および2/3マウスで腫瘍が生成され、それぞれ12、25、25、25日の潜在間隔が著しく減少しました。各腫瘍の染色体補体はヒトであり、一貫して偽倍体であり、Y染色体を保持しました。アンカー非依存性および接着細胞成長アッセイの両方で、EGFは親のP69SV40T系統と腫瘍サブリンの両方で増殖を約2倍刺激しました。腫瘍サブリンは、西部の免疫ブロッティングとフローサイトメトリー分析によって評価されるように、親系統よりもEGFRタンパク質が少ないことを発現しました。免疫沈降により、検出可能なEGFRの減少と平行に平行な18および25 kDa TGF-alpha前駆体の産生の増加が明らかになりました。親のP69SV40T系統と腫瘍サブリンの両方の成長は、血清を含まない定義された条件下でTGF-alphaに対する中和抗体によって阻害されました。TGF-alpha中和抗体を含めると、増殖と[3H]チミジン取り込みアッセイの両方で、腫瘍サブリンの増殖がp69Sv40Tを超えることを一貫して阻害しました。この発見は、ヒト前立腺腫瘍細胞間で観察される腫瘍形成性の増加と潜在的間隔の減少が、TGF-α/EGFRオートクリンネットワークの活性化によるものであることを示唆しています。

Our primary objectives were to: 1) develop a system for the study of prostatic tumor evolution; and 2) examine the role of the epidermal growth factor/epidermal growth factor receptor (EGF/EGFR) pathway in prostate tumor progression. Adult human prostate epithelial cells previously immortalized by transfection with the SV40 T antigen gene (P69SV40T) produced tumors in only 2/18 mice with a 6 month latency period. Reinjection of cells recovered from these tumors after 1 or 2 cycles of growth in nude mice produced tumors in 2/4 and 2/3 mice with markedly decreased latent intervals of 12, 25, 25 and 25 days each. The chromosomal complement of each tumor was human, consistently pseudodiploid, and retained the Y chromosome. In both anchorage-independent and adherent cell growth assays, EGF stimulated proliferation by approximately 2-fold in both the parental P69SV40T line and the tumor sublines. The tumor sublines expressed less EGFR protein than the parental line, as assessed by Western immunoblotting and flow cytometric analysis. Immunoprecipitation revealed increased production of the 18 and 25 kDa TGF-alpha precursors parallel to decreases in detectable EGFR. The growth of both the parental P69SV40T line and the tumor sublines was inhibited by a neutralizing antibody to TGF-alpha under serum-free defined conditions. Inclusion of the TGF-alpha neutralizing antibody consistently inhibited the proliferation of the tumor sublines more than P69SV40T in both proliferation and [3H]thymidine incorporation assays. This finding suggests that the increased tumorigenicity and decreased latent interval observed among the human prostate tumor cells is partially due to activation of the TGF-alpha/EGFR autocrine network.