細胞DNAポリメラーゼアルファプライマーゼは、パピロマウイルスDNA複製に必要であり、ウイルスE1ヘリカーゼと関連しています

パピロマウイルスによる持続性感染には、核プラスミドとしてのウイルスDNAの維持が含まれ、その複製には宿主DNAポリメラーゼが必要です。細胞DNAポリメラーゼアルファ - プライマーゼホロ酵素の役割は、ウイルスE1ヘリカーゼおよびE2転写因子の存在下で、ウシパピローマウイルス1およびヒト乳頭腫ウイルス6b DNAを複製するげっ歯類細胞からの可溶性抽出物を使用してプローブされました。ポリメラーゼアルファの触媒180-KDAサブユニットに向けられたモノクローナル抗体は、このシステムのDNA合成を阻害します。中和抽出物に精製されたヒトポリメラーゼアルファ - プライマーゼホロ酵素を添加すると、DNA合成活性が回復します。E1のアミノ末端424アミノ酸は、p180ポリメラーゼサブユニットと特定のタンパク質複合体を形成します。免疫複合体は、DNAポリメラーゼ活性を含むE1に向けられた抗体で分離できます。さらに、このポリメラーゼ活性は、抗ポリメラーゼアルファ抗体によって中和することができます。ウシE1はマウスおよびヒトの複製装置と互換性があるため、このin vitroシステムでは容易性の障壁は遭遇しませんでした。SIMIANウイルス40およびポリオマによってコードされた大きな腫瘍抗原は、乳頭腫E1タンパク質と一次シーケンスを制限していますが、一次タンパク質構造のレベルでの機能的モチーフの組織化は著しく類似しています。それらの起源特異的DNA結合活性に加えて、これらのヘリカーゼのそれぞれは、細胞ポリメラーゼアルファプリマーゼ複合体をウイルス複製起源に動員するのに役立つように機能する可能性があります。

Persistent infection by papillomaviruses involves the maintenance of viral DNA as a nuclear plasmid, the replication of which requires host DNA polymerases. The role of the cellular DNA polymerase alpha-primase holoenzyme was probed by using soluble extracts from rodent cells that replicate bovine papilloma virus 1 and human papilloma virus 6b DNA in the presence of the viral E1 helicase and the E2 transcription factor. Monoclonal antibodies directed against the catalytic 180-kDa subunit of polymerase alpha inhibit DNA synthesis in this system. Addition of purified human polymerase alpha-primase holoenzyme to neutralized extracts restores their DNA synthetic activity. The amino-terminal 424 amino acids of E1 forms a specific protein complex with the p180 polymerase subunit. Immune complexes can be isolated with antibodies directed against E1 that contain a DNA polymerase activity. Moreover, this polymerase activity can be neutralized by anti-polymerase alpha antibodies. Permissivity barriers were not encountered in this in vitro system, as bovine E1 can interface with the murine and human replication apparatus. Although the large tumor antigens encoded by simian virus 40 and polyoma share limited primary sequence homology with the papillomavirus E1 proteins, the organization of functional motifs at the level of primary protein structure is remarkably similar. In addition to their origin-specific DNA-binding activity, each of these helicases may function to help recruit the cellular polymerase alpha-primase complex to the viral replication origin.