誘導細胞分化の過程でG2におけるRBタンパク質の後期脱リン酸化

G0停止と細胞分化の誘発された細胞プログラム中のRBタンパク質（網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子産物）の細胞周期位相特異的リン酸化状態が特徴付けられました。RBタンパク質のリン酸化状態は、細胞増殖または停止の重要な決定要因であると推定されています。HL-60ヒト白血病細胞の増殖と分化中のRBタンパク質のリン酸化と脱リン酸化の細胞周期位相特異性は、DNAベースの蛍光活性化細胞の並べ替えと西洋分析を使用して決定されました。増殖するG1細胞のRBタンパク質はリン酸化されましたが、比較的低いレベルでした。リン酸化の程度はS相細胞で増加し、G2 + M細胞で最大でした。細胞をレチノイン酸または1,25-ジヒドロキシビタミンD3で処理した後、G1/0で蓄積し始め、表現型に変換しました。有意な非リン酸化RBタンパク質は、最初の細胞が停止および分化するまでは現れませんでした。RBタンパク質の脱リン酸化は、停止の発症後、残りのサイクリング細胞でG2の開始時に最初に明らかになり、分化がすでに発生していました。残りのサイクリング細胞が分裂して停止し、G0細胞が生じるまでに、RBタンパク質の大部分が脱リン酸化されましたが、一部はリン酸化されたままでした。データは、Rbの脱リン酸化がG1/0の居住を決定しないことを示しています。むしろ、脱リン酸化は、G0に逮捕された表現型分化された細胞に至る代謝カスケードの比較的遅い成分成分として現れます。脱リン酸化RBは、分化した細胞の特徴として現れます。データは、低リン酸化RBの役割と一致しており、派生状態を維持する可能性があります。

The cell cycle phase-specific phosphorylation status of the RB protein (retinoblastoma tumor suppressor gene product) during an elicited cellular program of G0 arrest and cell differentiation was characterized. The RB protein phosphorylation state is presumed to be an important determinant of cell proliferation or arrest. The cell cycle phase specificity of RB protein phosphorylation and dephosphorylation during HL-60 human leukemia cell proliferation and differentiation was determined using DNA-based fluorescence-activated cell sorting and Western analysis. The RB protein in proliferating G1 cells was phosphorylated, but at a relatively low level. The extent of phosphorylation increased in S phase cells and was maximum in G2 + M cells. After the cells were treated with retinoic acid or 1,25-dihydroxy vitamin D3, they began to accumulate in G1/0 and phenotypically convert. Significant unphosphorylated RB protein did not appear until after the first cells had arrested and differentiated. Dephosphorylation of the RB protein was first apparent at the beginning of G2 in the remaining cycling cells after onset of arrest and differentiation had already occurred. By the time the remaining cycling cells had divided and arrested, resulting in G0 cells, a majority of RB protein was dephosphorylated, but some remained phosphorylated. The data indicate that dephosphorylation of RB does not determine residence in G1/0. Rather dephosphorylation appears as one relatively late-occurring component of the metabolic cascade culminating in G0-arrested, phenotypically differentiated cells. Dephosphorylated RB appears as a feature of differentiated cells. The data are consistent with a role for hypophosphorylated RB not so much in deriving, but in possibly sustaining the differentiated state.