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FAS3/ACC調節領域の配列を決定し、転写開始部位をマッピングしました。このシーケンスには、2つの推定Uasinoシーケンスがあります。削除と突然変異の分析により、ヌクレオチド-719から-710のウアシノ配列が機能的であることが明らかになりました。FAS3-LACZレポーター遺伝子の発現と、リン脂質生合成の調節変異体におけるmRNAレベルの測定は、FAS3がイノシトールとコリンによって調節されていることを明確に示しています。以前の研究では、脂肪酸シンターゼ、FAS1およびFAS2をコードする遺伝子がイノシトールによって調節されることが示されています（Chirala、S.S. [1992]Proc。Acad。Sci。USA89、10232-10236）。したがって、飽和脂肪酸生合成に関与する3つの遺伝子はすべて、リン脂質生合成によって協調的に調節されています。FAS1、FAS2、およびFAS3に存在するUasinoシーケンスの比較は、このUAS要素の機能配列がyttcacatgであることを示唆しています。しかし、機能性のUasinoが変異した場合でも、FAS3-LACZレポーター遺伝子の実質的な発現が観察されました。削除分析、電気泳動移動度シフトアッセイ、および異種レポーター遺伝子を使用した発現は、ヌクレオチド-840と-736の間の領域に2つのUAS要素があることを示しました。同じ配列がFAS3の脂肪酸媒介抑制の原因であると思われます。これらの追加のUASシーケンスの存在は、イノシトールとコリンを抑制しても培地に存在する場合でも、酵母が脂肪酸を必要としない理由を説明しています。
FAS3/ACC調節領域の配列を決定し、転写開始部位をマッピングしました。このシーケンスには、2つの推定Uasinoシーケンスがあります。削除と突然変異の分析により、ヌクレオチド-719から-710のウアシノ配列が機能的であることが明らかになりました。FAS3-LACZレポーター遺伝子の発現と、リン脂質生合成の調節変異体におけるmRNAレベルの測定は、FAS3がイノシトールとコリンによって調節されていることを明確に示しています。以前の研究では、脂肪酸シンターゼ、FAS1およびFAS2をコードする遺伝子がイノシトールによって調節されることが示されています（Chirala、S.S. [1992]Proc。Acad。Sci。USA89、10232-10236）。したがって、飽和脂肪酸生合成に関与する3つの遺伝子はすべて、リン脂質生合成によって協調的に調節されています。FAS1、FAS2、およびFAS3に存在するUasinoシーケンスの比較は、このUAS要素の機能配列がyttcacatgであることを示唆しています。しかし、機能性のUasinoが変異した場合でも、FAS3-LACZレポーター遺伝子の実質的な発現が観察されました。削除分析、電気泳動移動度シフトアッセイ、および異種レポーター遺伝子を使用した発現は、ヌクレオチド-840と-736の間の領域に2つのUAS要素があることを示しました。同じ配列がFAS3の脂肪酸媒介抑制の原因であると思われます。これらの追加のUASシーケンスの存在は、イノシトールとコリンを抑制しても培地に存在する場合でも、酵母が脂肪酸を必要としない理由を説明しています。
We have determined the sequence of the FAS3/ACC regulatory region and mapped the transcription initiation site. In this sequence, there are two putative UASINO sequences. Deletion and mutation analyses revealed that the UASINO sequence at nucleotides -719 to -710 is functional. The expression of FAS3-lacZ reporter genes and the measurement of mRNA levels in regulatory mutants of phospholipid biosynthesis clearly indicated that FAS3 is regulated by inositol and choline. Previous studies have shown that the genes coding for fatty acid synthase, FAS1 and FAS2, are regulated by inositol (Chirala, S.S. [1992] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 10232-10236). Thus all three genes involved in saturated fatty acid biosynthesis are coordinately regulated with phospholipid biosynthesis. Comparison of the UASINO sequences present in FAS1, FAS2, and FAS3 suggested that the functional sequence of this UAS element is YTTCACATG. However, even when the functional UASINO was mutated, substantial expression of the FAS3-lacZ reporter gene was observed. Deletion analysis, electrophoretic mobility shift assays, and expression using a heterologous reporter gene showed that the region between nucleotides -840 and -736 has two UAS elements. The same sequence seems to be responsible for fatty acid-mediated repression of FAS3. The presence of these additional UAS sequences explains why yeast does not require fatty acids even when repressing amounts of inositol and choline are present in the medium.
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