新しいタイプのGALベータ1,3GALNACアルファ2,3-シアリルトランスフェラーゼに対するcDNAのクローニングと発現

以前にクローン化されたシアリルトランスフェラーゼの高度に保存されたセグメントの配列に基づいて、新しいタイプのGALベータ1,3GALNACアルファ2,3-シアリルトランスフェラーゼ（ST3GALA.2）をコードするcDNAは、マウスとラットの脳cDNAライブラリの両方から分離されています。cDNA配列には、350アミノ酸のオープンリーディングフレームコードが含まれており、この酵素の主要な構造は、他のグリコシルトランスフェラーゼのような4つの領域で構成される推定ドメイン構造を示唆しています。ST3GALA.2（マウス）の推定アミノ酸配列は、以前にクローン化されたマウスGALベータ1,3GALNACアルファ2,3-シアリルトランスフェラーゼ（ST3GALA.1（Lee、Y.C。、黒崎、N。、Hamamoto、T.、Nakaoka、Tsuji、S。（1993）Eur。ノーザンブロッティングは、ST3GALA.2 mRNAの発現は組織特異的であり、脳と肝臓では顕著であり、他の組織では非常に低いことを示しました。COS-7細胞で発現したこの酵素は、糖脂質のGALベータ1,3galNACの糖尿病1,3GALNACおよび糖タンパク質およびST3GALA.1のオリゴ糖の分散糖部分に対してのみトランスフェーゼ活性を示しましたが、受容体基板の好み、つまりasialo-gm1およびGM1ST3GALA.1よりもST3GALA.2にはるかに適した基質でした。

Based on the sequences of the highly conserved segments in the previously cloned sialyltransferases, a cDNA encoding a new type of Gal beta 1,3GalNAc alpha 2,3-sialyltransferase (ST3GalA.2) has been isolated from both mouse and rat brain cDNA libraries. The cDNA sequences included an open reading frame coding for 350 amino acids, and the primary structure of this enzyme suggested a putative domain structure consisting of four regions, like that in other glycosyltransferases. The deduced amino acid sequence of ST3GalA.2 (mouse) showed 76% identity in the active domain with that of the previously cloned mouse Gal beta 1,3GalNAc alpha 2,3-sialyltransferase (ST3GalA.1 (Lee, Y.-C., Kurosawa, N., Hamamoto, T., Nakaoka, T., and Tsuji, S. (1993) Eur. J. Biochem. 216, 377-385)). Northern blotting indicated that the expression of ST3GalA.2 mRNA is tissue-specific, it being prominent in brain and liver, while that in the other tissues is very low. This enzyme expressed in COS-7 cells exhibited transferase activity only toward the disaccharide moiety of Gal beta 1,3GalNAc of glycolipids as well as glycoproteins and oligosaccharides like ST3GalA.1, but showed a difference in acceptor substrate preference, i.e. asialo-GM1 and GM1 were much more suitable substrates for ST3GalA.2 than for ST3GalA.1.