マウスの微細なウイルスの非構造タンパク質をコードするプレmRNAの代替スプライシングは、下流のイントロン内の配列によって促進されます

マウスのパルボウイルス微小ウイルスのmRNAS R1およびR2は、2つの必須ウイルス調節タンパク質NS1とNS2をコードします。両方のRNAは、MAPユニット44と46（ヌクレオチド2280および2399）の間にスプライスされています。R2 RNAは、非継続されたドナーと貧弱な3 'スプライス部位を使用して、MAPユニット10と39（ヌクレオチド514および1989）の間でさらに上流にスプリームされています。R1とR2の相対的な蓄積は、代替のスプライシングによって決定されます。ウイルス感染全体でR1の定常状態の蓄積が2倍であることがありますが、同じプロモーターから生成され、見分けがつかない安定性があります。ここでは、R2を生成するための大きなイントロンの効率的な切除が、少なくとも下流の小さなイントロン内のシーケンスのP4生成前の前MRNAでの少なくとも初期存在に依存することを実証します。この効果は方向に依存し、介在するエクソンのサイズに関連しています。小さなイントロンの以前のスプライシングは不要です。大きなイントロンの切除は、ドナー部位をコンセンサスに変更することにより強化されますが、小さなイントロンシーケンスの存在下でのみです。大きなイントロンの切除は、その3 'スプライス部位内のポリピリミジントラクトを改善することにより強化されます。ただし、対照的に、この変更により、下流の小さなイントロンとは無関係に大きなイントロンの切除が行われます。小さなイントロン内のシーケンスは、上流の大きなイントロンの効率的な切除において主要な役割を果たすことをお勧めします。おそらく、スプライセームの要素の初期入力部位として、大きなイントロンの3 'スプライス部位内のポリピリミジン地域への必要な因子の結合を安定させることをお勧めします。

mRNAs R1 and R2 of the parvovirus minute virus of mice encode the two essential viral regulatory proteins NS1 and NS2. Both RNAs are spliced between map units 44 and 46 (nucleotides 2280 and 2399); R2 RNAs are additionally spliced upstream between map units 10 and 39 (nucleotides 514 and 1989), using a nonconsensus donor and poor 3' splice site. The relative accumulation of R1 and R2 is determined by alternative splicing: there is twice the steady-state accumulation of R2 relative to that of R1 throughout viral infection, though they are generated from the same promoter and have indistinguishable stabilities. Here we demonstrate that efficient excision of the large intron to generate R2 is dependent on at least the initial presence, in P4-generated pre-mRNAs, of sequences within the downstream small intron. This effect is orientation dependent and related to the size of the intervening exon. Prior splicing of the small intron is unnecessary. Excision of the large intron is enhanced by changing its donor site to consensus, but only in the presence of the small intron sequences. Excision of the large intron is also enhanced by improving the polypyrimidine tract within its 3' splice site; however, in contrast, this change renders excision of the large intron independent of the downstream small intron. We suggest that sequences within the small intron play a primary role in efficient excision of the upstream large intron, perhaps as the initial entry site(s) for an element(s) of the splicesome, which stabilizes the binding of required factors to the polypyrimidine tract within the 3' splice site of the large intron.