ロドコッカスロドクチルスCTMのカテコール2,3-ジオキシゲナーゼ遺伝子：ヌクレオチド配列、能力能力ジオキシゲナーゼとの比較、および活性部位ヒスチジンの証拠

無細胞抽出物では、ロドコッカスlodochrous ctm aカテコール2,3-ジオキシゲナーゼ（C23O）からの3.5 kb BG/IIフラグメントのプラスミドPTC1の3.5 kb BG/IIフラグメントを抱えています。R. lodochrous CTMおよびその隣接領域のC23Oのプラスミドエンコード遺伝子を配列決定しました。遺伝子の前では、大腸菌プロモーターに似たAシーケンスが同定され、大腸菌TG1のクローン遺伝子の構成的発現が生じました。C23Oの導出されたアミノ酸配列は、他の9つの酵素のアミノ酸配列と比較されました。これはすべて、芳香族環の脱毛症の切断を触媒しました。これらの9つの配列は、ここで説明するシーケンスとは対照的に、グラム陽性の細菌からの異なるシュードモナス株からのものでした。4つの強力に保存されたヒスチジンの役割は、ジエチルピルボネートによる天然酵素のヒスチジル残基の化学修飾によって調べられました。そのため、C23Oは、PSC1701を抱える大腸菌の均一性に精製されました。しかし、酵素は精製中にその活性を失いました。活性は、Fe2+による治療と還元剤による治療によって部分的に回復することができます。

In cell-free extracts of Escherichia coli clones harbouring the 3.5 kb Bg/II fragment of plasmid pTC1 from Rhodococcus rhodochrous CTM a catechol 2,3-dioxygenase (C23O) accepting both 3-methylcatechol and 2,3-dihydroxybiphenyl as substrates could be detected. The plasmid-encoded gene for C23O of R. rhodochrous CTM and its flanking regions were sequenced. In front of the gene a sequence resembling an E. coli promoter was identified, which led to constitutive expression of the cloned gene in E. coli TG1. The derived amino acid sequence of the C23O was compared to that of nine other enzymes, which all catalyse the extradiol cleavage of an aromatic ring. These nine sequences were from different Pseudomonas strains, in contrast to the sequence described here, from a Gram-positive bacterium. The role of four strongly conserved histidines was examined by chemical modification of the histidyl residues of the native enzyme by diethylpyrocarbonate. For that purpose the C23O was purified to homogeneity from E. coli harbouring pSC1701. However, the enzyme lost its activity during the purification. Activity could partially be restored by treatment with Fe2+ and reducing agents.