Wortmanninは強力なホスファチジルイノシトール3-キナーゼ阻害剤です。好中球反応におけるホスファチジルイノシトール3,4,5-三リン酸の役割

ホスファチジルイノシトール3,4,5-三リン酸（Ptdinsp3）は、化学誘引物質N--メチオニル - レシルフェニルアラニン（FMLP）に好中球を曝露すると急速に産生され、第二のメッセンジャーを媒介するアクチン重合および救急ブルスト活性を媒介する第二のメッセンジャー媒介として行動することが提案されています。ここでは、呼吸器燃焼活性の既知の阻害剤であるワートマニンが、ptdins（4,5）p2からptdinsp3を産生する酵素であるptdins 3-キナーゼに作用するという証拠を提示します。100 nmのワートマニンを含む32p標識ヒト好中球の前処理は、FMLPを介したPtdinsP3産生を完全に廃止し、Ptdinsp2レベルを上昇させ、細胞PtdinspおよびPtdinsの含有量に影響しませんでした。無傷の細胞におけるPTDINSP3形成に対する阻害効果は用量依存性であり、IC50は約5 nmでした。同様の結果は、P85調節サブユニットに対する抗体によって抗体によって免疫沈降したPTDINS 3-キナーゼで得られました：wortmanninは、10〜100 nm（IC50約1 nm）の濃度で免疫沈降中のPTDINS3P産生を完全に阻害しました。これらの結果は、WortmanninによるPtdins 3-Kinaseの直接的および特異的阻害を示しています。アゴニストを介した呼吸器炎の活性化は、ワートマニン（IC50 = 12 nm）に最も敏感であるため、これはアゴニストを介したPTDINSP3形成がこの細胞応答に不可欠であることを示唆しています。ワートマンニンで前処理した好中球は、F-アクチン含有量に振動変化を発生させますが、FMLPに応答したアクチン重合は阻害されません。これ、およびこれらの条件下でのPTDINSP3の欠如は、細胞骨格再編成におけるPTDINSP3の調節的役割と一致していますが、PTDINSP3の生産は、好中球のアクチンフィラメントの伸びを引き起こす主要なイベントではないことを意味します。

Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PtdInsP3) is rapidly produced upon exposure of neutrophils to the chemoattractant N-formylmethionyl-leucylphenylalanine (fMLP), and has been proposed to act as a second messenger mediating actin polymerization and respiratory-burst activity. Here we present evidence that wortmannin, a known inhibitor of respiratory-burst activity, acts on PtdIns 3-kinase, the enzyme producing PtdInsP3 from PtdIns(4,5)P2. Pretreatment of 32P-labelled human neutrophils with 100 nM wortmannin totally abolished fMLP-mediated PtdInsP3 production, raised PtdInsP2 levels, and did not affect cellular PtdInsP and PtdIns contents. The inhibitory effect on PtdInsP3 formation in intact cells was dose-dependent, with an IC50 of approximately 5 nM. Similar results were obtained with PtdIns 3-kinase immunoprecipitated by antibodies against the p85 regulatory subunit: wortmannin totally inhibited PtdIns3P production in immunoprecipitates at concentrations of 10-100 nM (IC50 approximately 1 nM). These results illustrate the direct and specific inhibition of PtdIns 3-kinase by wortmannin. Since agonist-mediated respiratory-burst activation is most sensitive to wortmannin (IC50 = 12 nM), this suggests that agonist-mediated PtdInsP3 formation is indispensable for this cell response. Neutrophils pretreated with wortmannin develop oscillatory changes in F-actin content, but actin polymerization in response to fMLP is not inhibited. This, and the absence of PtdInsP3 under these conditions, are in agreement with a modulatory role for PtdInsP3 in cytoskeletal rearrangements, but imply that PtdInsP3 production is not a primary event triggering elongation of actin filaments in neutrophils.