Trichoderma reeseiの高周波1段階の遺伝子補充は、個々のセルラーゼ遺伝子の欠失の効果

Trichoderma reesei、CBH1、CBH2、EGL1、およびEGL2の4つのセルラーゼ遺伝子は、AMDSマーカー遺伝子に置き換えられています。1 kBを超える対応するセルラーゼ遺伝子座の線形DNAフラグメントと隣接領域を使用した場合、32〜52％の範囲で、置換周波数が高くなりました。主要なセロビオヒドラーゼ1遺伝子の欠失により、セロビオヒドロラーゼIIの産生が2倍増加しました。ただし、CBH2遺伝子の置換は、最終的なセルラーゼレベルに影響を与えず、EGL1またはEGL2の欠失は両方のセロビオヒドロラーゼの産生をわずかに増加させました。我々の結果に基づいて、エンドグルカナーゼIIは、高細胞分解宿主株によって生成されるエンドグルカナーゼ活性のほとんどを説明しています。さらに、EGL2遺伝子の喪失は、濾紙腫瘍活性の有意な低下を引き起こし、エンドグルカナーゼIIがセルロースの全加水分解に重要な役割を果たしていることを示しています。

Four cellulase genes of Trichoderma reesei, cbh1, cbh2, egl1 and egl2, have been replaced by the amdS marker gene. When linear DNA fragments and flanking regions of the corresponding cellulase locus of more than 1 kb were used, the replacement frequencies were high, ranging from 32 to 52%. Deletion of the major cellobiohydrolase 1 gene led to a 2-fold increase in the production of cellobiohydrolase II; however, replacement of the cbh2 gene did not affect the final cellulase levels and deletion of egl1 or egl2 slightly increased production of both cellobiohydrolases. Based on our results, endoglucanase II accounts for most of the endoglucanase activity produced by the hypercellulolytic host strain. Furthermore, loss of the egl2 gene causes a significant drop in the filter paper-hydrolysing activity, indicating that endoglucanase II has an important role in the total hydrolysis of cellulose.